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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
乳房鏈球菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Streptococcus uberis |
貨號(hào) | CP934760 |
產(chǎn)品特征:
乳房鏈球菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br/>探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是乳房鏈球菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
phospho-Tau protein(Thr231) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體倉(cāng)鼠白介素1α(IL-1α)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Thr212) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體倉(cāng)鼠γ干擾素(IFNG)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Thr205) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體倉(cāng)鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Thr181) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體倉(cāng)鼠E選擇素(SELE)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser721) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser422) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser416) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝脂蛋白脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser404) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser396) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝過(guò)氧化酶ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser356) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)ELISA試盒
乳房鏈球菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒phospho-Tau protein(Ser262) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser235) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體駱駝β內(nèi)肽(β-EP)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser214) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體裸鼠ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser202) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試盒
phospho-Tau protein(Ser199) 酸化微管相關(guān)蛋白抗體裸鼠種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)ELISA試盒人內(nèi)皮細(xì)胞分離液1.060Cell Separation Solution-20℃保存200 mL
人免疫缺陷病PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
人淋巴細(xì)胞分離液1.077（FICOLL 配置） Cell Separation Solution-20℃保存200 mL
人淋巴細(xì)胞分離液1.077Cell Separation Solution-20℃保存200 mL
人粒細(xì)胞分離液1.113Cell Separation Solution-20℃保存200 mL
人類單鏈選擇性單功能尿嘧啶-DNA糖基化酶hSMUG1-20℃保存500U
人巨細(xì)胞病PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸，-20℃保存50T
人基化/非基化DNA標(biāo)準(zhǔn)品Human Methylated/Non-methylated DNA Standard4℃保存100次
人基質(zhì)金屬蛋白酶基因PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
人基因組DNA混合液Human Genomic DNA Mix4℃保存100µg