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產(chǎn)品簡介
卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Pneumocystis carinii |
貨號 | CP934605 |
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
探針法：
卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對,。熒光基團連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時,，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,，使得熒光基團與淬滅劑分離,。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累,。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號,。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。5.換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
7.換槍頭,，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
VSIG4 T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA試盒
VRK1 牛痘病相關(guān)激酶1抗體（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶VRK1）小鼠5羥基吲哚酸(5-HIAA)ELISA試盒
VPS4a 液泡分選蛋白4抗體小鼠5羥二十碳四烯酸(5-HETE)ELISA試盒
VPS18 空泡分選蛋白18抗體小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試盒
VP2 重組豬細(xì)小病VP2蛋白抗體小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試盒
VNN1 血管非炎癥分子1抗體小鼠4-羥基壬烯酸(HNE)ELISA試盒
VMAT2 腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白抗體小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試盒
卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒VMAT1/VAT1 嗜鉻顆粒胺轉(zhuǎn)運蛋白VAT1抗體小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試盒
VLDL Receptor 極低密度脂蛋白受體抗體小鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試盒
Vitamin D Receptor/VDR 維生素D3受體抗體小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試盒
Vitamin D Binding protein 維生素D結(jié)合蛋白抗體小鼠3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA試盒
Visfatin-1(CT) 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體)小鼠3-α羥基類固醇脫酶(Akr1c9)ELISA試盒
Viperin/RSAD2 病抑制蛋白Viperin抗體小鼠3-O-基多巴(3-OMD)ELISA試盒
VIP receptor 2/VPAC2 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體小鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試盒
VIP Receptor 1/VAPC1 血管活性腸肽受體-1抗體小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA試盒安西奈德 Amcinonide51022-69-650mg，供HPLC法含量測定用
安妥沙星 Antofloxacin100mg/支,，供HPLC含量測定用
艾司奧美拉唑鈉 Esomeprazole Sodium161796-78-750mg/支,，IR鑒別
艾司奧美拉唑鈉 Esomeprazole Sodium161796-78-750mg/支，IR鑒別
艾普拉唑磺?；铮ò绽螂s質(zhì)A）－2-｛［（4-氧基-3-基）-2-吡啶基］基｝-磺?；?5-（1-吡咯-1-基）-1-苯并咪唑供檢查用
艾普拉唑磺酰化物（艾普拉唑雜質(zhì)A）－2-｛［（4-氧基-3-基）-2-吡啶基］基｝-磺?；?5-（1-吡咯-1-基）-1-苯并咪唑供檢查用
艾普拉唑 Ilaprazole10mg,，供HPLC含量測定用
艾普拉唑 Ilaprazole10mg，供HPLC含量測定用
癌胚抗原(CEA)3支/套,，0.5ml/支,，供免疫測定用
癌胚抗原(CEA)3支/套，0.5ml/支,，供免疫測定用
注意事項：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間,；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。