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50T-鼻疽假單胞菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒
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貨物所在地: 上海上海市
地: 進口,、國產
更新時間: 2025-03-20 21:00:08
期: 2025年3月20日--2025年9月20日
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(聯(lián)系我們,,請說明是在 化工儀器網(wǎng) 上看到的信息,謝謝?。?/p>

產品簡介

鼻疽假單胞菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。

詳細介紹

需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機,、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調移液器(2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL),。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管,、吸頭(10 µL,、200 µL、1000 µL),、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點:
1.產品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,,操作簡單,,定量準確快速。
2. 引物經過優(yōu)化,,特異性強,。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,,PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果,。

產品名稱

鼻疽假單胞菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

英文名稱

Pseudomonas mallei

貨號

CP934640


產品特征:

鼻疽假單胞菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,,受干擾影響少,。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應體系中,,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,,產品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步,。

熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀,?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度,。
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