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產(chǎn)品簡介
真鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Red Sea Bream Iridovirus(RSIV) |
貨號(hào) | CP934655 |
產(chǎn)品特征:
真鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是真鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
SM-MHC 心肌肌球蛋白抗體（α-myosin）人補(bǔ)體因子B前體(pre-CFB)ELISA試盒
SMEK2/PP4R3B 絲氨酸/蘇氨酸蛋白酸酶3B抗體人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA試盒
SMC6 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白6抗體人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試盒
SMC5 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白5抗體人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA試盒
SMC4 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試盒
SMC3/CSPG6 基底膜相關(guān)軟骨素蛋白多糖抗體人補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試盒
SMC2 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白2抗體人補(bǔ)體片段4d(C4d)ELISA試盒
SMC1 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體人補(bǔ)體片段3d(C3d)ELISA試盒
SMARCD3 肌動(dòng)蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體人補(bǔ)體片段3c(C3c)ELISA試盒
SMARCA6/HELLS 淋巴特異性解旋酶抗體人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA試盒
SMARCA4/SNF2 beta/BRG1 抑癌基因SNF2β抗體人補(bǔ)體蛋白9(C9)ELISA試盒
SMARCA2/BRM ATP依賴解旋酶SMARCA2抗體人補(bǔ)體蛋白5(C5)ELISA試盒
真鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒SMARCA1/SNF2L 解旋酶SNF2L抗體人補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試盒
SMAGP 小細(xì)胞跨膜糖化蛋白抗體人補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試盒
SMAD9 SMAD家族9抗體人補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1(C1QTNF1/CTRP1)ELISA試盒2,2',4,4',6,6'-六聯(lián)苯 13C122,2',4,4',6,6'-HEXABDE(13C12, 99%)(BDE-155)1.2ml
2,2',4,4',5-五聯(lián)苯醚2,2',4,4',5-PENTABDE1.2ml
2,2',4,4',5-五聯(lián)苯 13C122,2',4,4',5-PentaBDE(13C12,99%)(BDE-99)1.2ml
2,2',4,4',5,6'-六聯(lián)苯醚2,2',4,4',5,6'-HEXABDE1.2ml
2,2',4,4',5,6'-六聯(lián)苯 13C122,2',4,4',5,6'-HexaBDE(13C12,99%)(BDE-154)1.2ml
2,2',4,4',5,5'-六聯(lián)苯醚2,2',4,4',5,5'-HEXABDE1.2ml
2,2',4,4',5,5'-六聯(lián)苯 13C122,2',4,4',5,5'-HexaBDE(13C12,99%)(BDE-153)1.2ml
2,2',3,4,4'-五聯(lián)苯醚2,2',3,4,4'-PENTABDE1.2ml
2,2',3,4,4',6-六聯(lián)苯醚2,2',3,4,4',6-HEXABDE(BDE-139)1.2ml
2,2',3,4,4',6'-六聯(lián)苯醚2,2',3,4,4',6'-HEXABDE(BDE-140)1.2ml
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研