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需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

產(chǎn)品特征:

李斯特菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br/>探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是李斯特菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：

二化烯細(xì)胞糖類(lèi)總量鐵化物比色法定量檢測(cè)試盒

二氰化烯組織糖類(lèi)總量鐵化物比色法定量檢測(cè)試盒

二氧化二烯血液糖類(lèi)總量鐵化物比色法定量檢測(cè)試盒

反-1,2-二烯體液糖類(lèi)總量鐵化物比色法定量檢測(cè)試盒

反式-1,2-雙(二苯膦基)烯植物糖類(lèi)化物比色法定量檢測(cè)試盒

反式-1.2-二烯糖類(lèi)總量硫酸-苯酚比色法定量檢測(cè)試盒

反式-1-基-2-戊基烯糖類(lèi)總量氨基苯硫酚熒光定量檢測(cè)試盒

反式-2-基-1,3-戊二烯細(xì)菌多聚糖PURPALD比色法定量檢測(cè)試盒

反式-2-辛烯細(xì)胞游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試盒

反式-3-壬烯組織游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試盒

反式-β-硝基苯烯血清/血漿游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試盒

過(guò)烯游離脂肪酸化學(xué)比色法定量檢測(cè)試盒

環(huán)庚三烯PH0-2顯色（BRILLIANT GREEN）指示溶液

環(huán)己烯基烯PH2-3顯色（CRESOL RED）指示溶液

李斯特菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒環(huán)戊烯并環(huán)庚烯PH3-4顯色（METHYL ORANGE）指示溶液 pIE1-neopIE1-neo低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

pIC111pIC111低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

pHY43pHY43低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug

pHY300pHY300低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

Phusion DNA聚合酶Phusion DNA Polymerase-20℃保存250U

pHT43pHT43低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

pHT315pHT315低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug

pHT304pHT304低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

pHT01pHT01低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug

phRL-TKphRL-TK低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug