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產(chǎn)品簡介
溶酪巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Macrococcus caseolyticus |
貨號 | CP934416 |
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
探針法：
溶酪巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對,。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時,，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時,，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累,。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,，分別為6,，5,，4，3,，2和1號,。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照,。
5. 換槍頭,，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中,，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步）,，每個樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸,，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout,。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。5.換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
6.換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
1-庚烯GMS10細(xì)菌
1-基-1,3-二烯GMS10基化基因鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-基-1,4-環(huán)己二烯GMS10基化基因電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-基-1-環(huán)己烯BJ5183細(xì)菌
1-基環(huán)己烯BJ5183鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-氰基烯BJ5183電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-十二烯BJ5183-AD-1鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-十三烯BJ5183-AD-1電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-十一碳烯*0細(xì)菌
1-戊烯*0鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1--2-苯基烯*0電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
1-基-1,3-二烯GMS15重組腺病載體繁殖超級化學(xué)感受態(tài)細(xì)菌
1-異基-4-基-1,4-環(huán)己二烯JM109細(xì)菌
溶酪巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2,2-二基-1-基烯JM109鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌
2,3,3-三基-1-烯JM109電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌Phosphatase Inhibitors Cocktail-I Phosphatase Inhibitors Cocktail-I 常溫保存5mL
Phosphatase Buffer-1,2X Phosphatase Buffer-1,2X 常溫保存100mL
Phorbol 12-myristate 13-acetate(PKC激活) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor-20℃保存1 mg
phMGFPphMGFP低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pHiSi-1pHiSi-1低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pHis2pHis2低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHIS1525pHIS1525低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pHispHis低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pHIL-S1pHIL-S1低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHIL-D2pHIL-D2低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間,；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。