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產(chǎn)品簡介
亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mycobacterium asiaticum |
貨號 | CP934462 |
亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度,。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
4-苯基-3-硫代氨基脲pSilencer-NEO＋SiRNA
4-苯基硫代氨基脲pBaBe-PURO＋MiRNA
N-(3--4-基苯基)-N',N'-二基脲pADEASY- pSHUTTLE＋目的基因
N'-(4-苯基)-N-氧基-N-基脲pSHUTTLE＋目的基因
N,N-二基-N'-(3--4-基苯基)脲pLKO.1-TRC＋siRNA
N,N-二基硒脲pGEX＋目的基因
N-苯基硫脲pPICZ＋目的基因
N-基硫脲pYES＋目的基因
α-萘硫脲pGBKT7＋目的基因
氨基酰脲pGADT7＋目的基因
亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒氨脲pFASTBAC＋目的基因
二酰硫脲pCAMBIA＋目的基因
酮縮氨基脲pZERO＋目的基因
次環(huán)硫脲動(dòng)物組織S9組分分離試盒
對稱二苯硫脲動(dòng)物組織微粒體組分分離試盒pcDNA3-YFPpcDNA3-YFP低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3-mRFPpcDNA3-mRFP低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3-EGFPpcDNA3-EGFP低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pcDNA3-CFPpcDNA3-CFP低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3.2（zeo）+pcDNA3.2（zeo）+低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3.1-RFPpcDNA3.1-RFP低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pcDNA3.1-EGFPpcDNA3.1-EGFP低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3.1/Zeo（+）pcDNA3.1/Zeo（+）低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug
pcDNA3.1/Zeo（-）pcDNA3.1/Zeo（-）低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pcDNA3.1/V6-His BpcDNA3.1/V6-His B低溫運(yùn)輸,，-20℃保存2 ug