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產(chǎn)品簡介
鏈球菌A組探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
詳細介紹
注意事項：1．基礎(chǔ)程序,；2．擴增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Group A Streptococcus spp.(GAS) |
貨號 | CP934286 |
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
探針法：
鏈球菌A組探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對,。熒光基團連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,，使得熒光基團與淬滅劑分離,。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累,。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
1. 標記6個離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號,。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標準曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。5.換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
7.換槍頭,，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
2-苯氧基胺全組織琥珀酸脫酶活性染色試盒
3-氧基噻吩冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試盒
4'--2'-氟苯酮全組織細胞色素C氧化酶活性染色試盒
鏈球菌A組探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-氨基嘧啶-5-腈冰凍切片細胞色素C氧化酶和琥珀酸脫酶（Combined COX-SDH）雙酶活性染色試盒
5-氟-2-基苯酸酯全組織細胞色素C氧化酶和琥珀酸脫酶（Combined COX-SDH）雙酶活性染色試盒
4-酸酯冰凍切片NADH心肌黃酶和琥珀酸脫酶（Combined NADH-TR-SDH）雙酶活性染色試盒
基碳酸異酯全組織NADH心肌黃酶和琥珀酸脫酶（Combined NADH-TR-SDH）雙酶活性染色試盒
硫酸奎寧二水合物冰凍切片酸性酸酶活性染色試盒
1,3-二酰基苯全組織酸性酸酶活性染色試盒
1,2-二苯冰凍切片酰膽脂酶活性染色試盒
環(huán)酰全組織酰膽脂酶活性染色試盒
2--5-(苯氧基)嘧啶冰凍切片肌腺苷酸脫氨酶（Myoadenylate deaminase）活性染色試盒
4-硝基苯基硼酸全組織肌腺苷酸脫氨酶（Myoadenylate deaminase）活性染色試盒
2-二吡啶基酮冰凍切片非特異性酯酶（Non-specific esterase）活性染色試盒
四苯基化膦全組織非特異性酯酶（Non-specific esterase）活性染色試盒烯葡聚糖凝膠 S-500 HRSephacryl S-500 HR室溫保存150mL
烯葡聚糖凝膠 S-400 HRSephacryl S-400 HR室溫保存150mL
烯葡聚糖凝膠 S-300 HRSephacryl S-300 HR 室溫保存150mL
烯葡聚糖凝膠 S-200 HRSephacryl S-200 HR室溫保存150mL
烯葡聚糖凝膠 S-100 HRSephacryl S-100 HR室溫保存150mL
酮酸鈉Pyruvic Acid Sodium Salt-20℃保存25g
酮酸激酶Pyruvate Kinase4℃保存50mg
二 測試盒/脂質(zhì)過氧化物測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存50 T
冰袋1個
變色硅膠Silica Gel室溫干燥保存1kg