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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
柏氏血矛線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Haemonchus placei |
貨號(hào) | CP934291 |
產(chǎn)品特征:
柏氏血矛線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是柏氏血矛線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
4-(4-基-1-基)苯胺冰凍切片中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試盒
3-異基-5-氨基異噁唑細(xì)胞中性脂質(zhì)油紅O染色試盒
N-苯基咔唑石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O間接染色試盒
4--2-氟苯酸石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O直接染色試盒
2-氟-4-苯腈冰凍切片中性脂質(zhì)油紅O染色試盒
2-氰基-4'-基聯(lián)苯細(xì)胞總膽固醇高酸萘醌（PAN）染色試盒
1-Boc-3-羥基吡咯石蠟切片總膽固醇高酸萘醌（PAN）間接染色試盒
3-(4-苯基)戊二酸單酰胺石蠟切片總膽固醇高酸萘醌（PAN）直接染色試盒
2-氟-3-碘吡啶冰凍切片總膽固醇高酸萘醌（PAN）染色試盒
(2R)-(-)-縮水甘油基對(duì)苯磺酸酯細(xì)胞游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高酸萘醌（PAN）染色試盒
柏氏血矛線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒4,6-二氧基-2-磺?；奏な炃衅坞x膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高酸萘醌（PAN）間接染色試盒
4,4'-二基-2,2'-聯(lián)吡啶石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高酸萘醌（PAN）直接染色試盒
2,3-二氟芐基冰凍切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高酸萘醌（PAN）染色試盒
4-氰基苯酸酯細(xì)胞總膽固醇舒爾茨染色試盒
3,4-二氟肉桂酸石蠟切片總膽固醇舒爾茨間接染色試盒氨基喋呤Aminopterin-20℃保存5mg
氨基磁珠Magnetic beads,Amino4℃密閉,、豎直保存2mL
氨芐青霉素溶液,50mg/mLAmpicillin Solution-20℃保存10mL
氨芐青霉素鈉Ampicillin, Sodium Salt4℃保存5g
氨芐青霉素干粉Ampicillin Powder4℃保存1g
氨芐抗性基因PCR引物Common PCR Primer-20℃保存100uL
矮壯素Chlormequat室溫保存100g
埃文斯藍(lán)Evans Blue 室溫干燥保存1g
埃立克體PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
埃博拉病PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T