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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
貓皰疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Feline Herpesvirus（FHV） |
貨號(hào) | CP934237 |
產(chǎn)品特征:
貓皰疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是貓皰疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
L-樟腦酸動(dòng)物糖蛋白酶解法O-糖基分解試盒
L-3-氰基苯氨酸動(dòng)物糖蛋白酶解法*糖基分解試盒
鋇鐵氧體動(dòng)物糖蛋白化學(xué)法*糖基分解試盒
反式-2,3-二-2-烯-1,4-二醇動(dòng)物糖蛋白酶解法非N非O糖基脂酰肌醇（GPI）分解試盒
三氟醋柳酸動(dòng)物糖蛋白電泳遷移檢測(cè)試盒
1-環(huán)己基哌啶動(dòng)物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾（PAS）法阿爾新藍(lán)（ALCIAN BLUE）染色試盒
4--2-氟酰苯胺動(dòng)物組織石蠟切片糖蛋白高碘酸希爾（PAS）法阿爾新藍(lán)（ALCIAN BLUE）染色試盒
貓皰疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒鄰氟苯酸酯動(dòng)物組織冰凍切片糖蛋白高碘酸希爾（PAS）法阿爾新藍(lán)（ALCIAN BLUE）染色試盒
4--2-氟苯酸動(dòng)物全組織糖蛋白高碘酸希爾（PAS）法阿爾新藍(lán)（ALCIAN BLUE）染色試盒
1-基-6,7,8-三氟-1,4-二-4-氧代喹啉-3-羧酸糖蛋白電泳高碘酸希爾（PAS）法阿爾新藍(lán)（ALCIAN BLUE）染色試盒
3--4-碘吡啶聚糖對(duì)氨基苯酸（2-AA）熒光標(biāo)記試盒
1-芐基-1H-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯聚糖對(duì)氨基苯酰胺（2-AB）熒光標(biāo)記試盒
十二(烷)酸芐酯苯基酯聚糖鄰氨基吡啶（2-AP）熒光標(biāo)記試盒
4-基苯硼酸聚糖二氨基亞基二氧基苯（DMB）熒光標(biāo)記試盒
D-(-)-酒石酸二酯氨基卞三磺酸（ANTS）熒光輔助糖蛋白電泳（FACE）檢測(cè)試盒雞痘病PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
雞敗血支原體PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T
肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T
肌球蛋白Myoglobin-20℃保存100mg
肌苷Inosine，F(xiàn)ree Base 室溫干燥保存5g
肌醇Inositol室溫干燥保存100g
霍亂弧菌熒光PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
霍亂弧菌PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
霍亂弧菌O1PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存50T