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產(chǎn)品簡介
口腔支原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快,，效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mycoplasma orale |
貨號 | CP934507 |
口腔支原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度,。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，產(chǎn)品僅用于科研報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果,。
以下是口腔支原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
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花生酸月桂醇酯(C20:0-C12:0)42232-82-6花生酸月桂醇酯(C20:0-C12:0),標(biāo)準(zhǔn)品，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸油醇酯(C20:0-C18:1)22393-96-0花生酸油醇酯(C20:0-C18:1),標(biāo)準(zhǔn)品,，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸亞油醇酯/花生酸亞麻醇酯(C20:0-C18:3)花生酸亞油醇酯/花生酸亞麻醇酯(C20:0-C18:3),標(biāo)準(zhǔn)品，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸亞油醇酯(C20:0-C18:2)花生酸亞油醇酯(C20:0-C18:2),標(biāo)準(zhǔn)品,，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸十四碳烯醇酯/花生酸肉豆蔻烯醇酯(C20:0-C14:1)花生酸十四碳烯醇酯/花生酸肉豆蔻烯醇酯(C20:0-C14:1),標(biāo)準(zhǔn)品，有證書 ,100mg
花生酸十八醇酯/花生酸硬脂醇酯(C20:0-C18:0)22432-79-7花生酸十八醇酯/花生酸硬脂醇酯(C20:0-C18:0),標(biāo)準(zhǔn)品,，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸肉豆蔻醇酯(C20:0-C14:0)22413-04-3花生酸肉豆蔻醇酯(C20:0-C14:0),標(biāo)準(zhǔn)品,，有證書 ,100mg/500mg/1gm
花生酸酯1120-28-150mg,，供檢查用
花生酸酯1120-28-150mg,，供檢查用