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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
木賊鐮刀菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fusarium equiseti |
貨號(hào) | CP934257 |
產(chǎn)品特征:
木賊鐮刀菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快,，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是木賊鐮刀菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
2,6-二氟煙酸生物素標(biāo)記二抗DAB顯色試盒
3,5-BIS(3-NITROPHENYL)-1,2,4-OXADIAZOLEFITC標(biāo)記二抗POD轉(zhuǎn)換試盒
S-腺苷-L-蛋氨酸通用型HRP－DAB底物顯色試盒
1,3,5-三苯?；?D-呋喃核糖增強(qiáng)型HRP－DAB底物顯色試盒
2-脫氧-2-氟-1,3,5-三苯?；?alpha-D-阿拉伯呋喃糖免疫組化AP－BCIP/NBT底物顯色試盒
1,2,3-三-O-酰基-5-脫氧-β-D-核糖免疫印跡AP－BCIP/NBT底物顯色試盒
N,9-二酰鳥(niǎo)嘌呤免疫組化AP－PNPP底物顯色定量試盒
6--9-(四-2-吡喃基)嘌呤免疫組化HRP－TMB底物顯色試盒
4-氨?；?3-苯基硼酸免疫印跡HRP－TMB底物顯色試盒
4,7-二-2,1,3-苯并噻二唑超敏型HRP－TMB底物顯色試盒
木賊鐮刀菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒2,3-二基萘通用型HRP－AEC底物顯色試盒
7-基靛紅增強(qiáng)型HRP－AEC底物顯色試盒
2--3-硝基苯酸AP－NPP底物顯色試盒
2-氨基-3,6-二苯酸基綠復(fù)染試盒
2,3-二氨基苯酸核固紅復(fù)染試盒非凍型拭子病保存液Virus-LOCKER4℃保存100mL
非凍型拭子DNA保存液B (有拭子) Swab DNALOCKER室溫100mL
非凍型拭子DNA保存液A (無(wú)拭子) Swab DNALOCKER室溫100mL
非凍型尿液DNA保存液Urine DNALOCKER室溫15mL
非凍型尿液DNA保存液Urine DNALOCKER室溫100mL
非變性法蛋白沉淀試盒Non-Denaturing Protein Precipitation Kit 常溫保存10次
放菌酮溶液,100mg/mLActidione Solution-20℃保存1mL
放線菌CHX（Cycloheximide From Microbial)4℃保存100mg
放線菌素D溶液,1mg/mLActinomycin D Solution-20℃避光保存1mL
放線菌素 DActinomycin D4℃保存1mg