詳細介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Herpesvirus Simiae(HVS) |
貨號 | CP934330 |
產(chǎn)品特征:
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,,抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好:擴增曲線重合度高,,受干擾影響少,。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,,效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
2-二氨基醇細胞NADPH細胞色素C還原酶(NADPH Cytochrome C Reductase)活性比色法定量檢測試盒
2-氟醇組織NADPH細胞色素C還原酶(NADPH Cytochrome C Reductase)活性比色法定量檢測試盒
2-己醇細胞NADPH細胞色素C還原酶(NADPH Cytochrome C Reductase)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試盒
2-基-1-醇組織NADPH細胞色素C還原酶(NADPH Cytochrome C Reductase)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試盒
2-基-2-醇β-葡萄糖酸酶(β-glucuronidase)活性比色法定量檢測試盒
2-基-2-醇羧酸酯酶(carboxylesterase)活性比色法定量檢測試盒
2-基-2-戊醇細胞谷氨酰半胱氨酸合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試盒
2-基-3-烯-2-醇組織谷氨酰半胱氨酸合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試盒
2-基-3-基-3-戊醇植物谷氨酰半胱氨酸合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試盒
2-基環(huán)己醇細胞谷氨酰胺酶(glutaminase)活性比色法定量檢測試盒
2-氧基醇組織谷氨酰胺酶(glutaminase)活性比色法定量檢測試盒
2-嘧啶硫醇植物谷氨酰胺酶(glutaminase)活性比色法定量檢測試盒
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-壬醇細菌谷氨酰胺酶(glutaminase)活性比色法定量檢測試盒
2-戊醇谷氨酰胺合酶(glutamine synthetase)活性酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量檢測試盒
2-硝基異醇谷氨酰胺脫羧酶RNase抑制(小鼠源)Murine RNase Inhibitor-20℃保存3000U
RNase抑制(人源)Human RNase Inhibitor-20℃保存400U
RNase抑制(人源)Human RNase Inhibitor-20℃保存2500U
RNase-free 異硫氰酸胍溶液,5M常溫100mL
RNase-free 酸鈉,3M,pH 5.2常溫100mL
RNase-free 鹽酸胍溶液,8M常溫100mL
RNase-free 水RNase-free Water常溫1mL
RNase-free 水RNase-free Water常溫10mL
RNase-free 化鋰溶液,10M常溫100mL
RNase-Free Tris-HCl Solution(無RNase的Tris-HCl溶液),1M,pH8.0 RNase-Free Tris-HCl Solution,1M,pH8.0 常溫保存250mL
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平,、離心機,、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管,、吸頭(10 µL、200 µL,、1000 µL),、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強,。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,,便于分析試驗結(jié)果,。產(chǎn)品僅用于科研