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產(chǎn)品簡介
茄病鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應緩沖液、PCR 增強劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應，具有廣泛的用途,。
詳細介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單，定量準確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強。預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗結果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fusarium solani |
貨號 | CP934263 |
產(chǎn)品特征:
茄病鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制,，抑制非特異性擴增 ,。
重復性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是茄病鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產(chǎn)品：
N-叔氧羰基-4-基哌啶-4-酸酯體液α-L-巖藻糖苷酶（AFU）熒光定量檢測試盒
5-基-2-硝基苯胺細胞總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試盒
4--2-氟苯組織總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試盒
4--2-氟苯胺血液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試盒
4-苯酸酯肝脂酶活性比色法定量檢測試盒
鄰碘苯脂蛋白脂酶活性比色法定量檢測試
2-呋喃胰腺脂酶活性比色法定量檢測試盒
茄病鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-異煙酸酯γ谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）定量檢測試盒
間硝基苯組織前列腺型酸性酸酶（PACP）活性比色法定量檢測試盒
3-氧基苯酮體液前列腺型酸型性酸酶（PACP）活性比色法定量檢測試盒
4-苯酰通用型抗酒石酸酸性酸酶（STRACP）活性比色法定量檢測試盒
3-基苯胺紅細胞型抗酒石酸酸性酸酶（STRACP）活性比色法定量檢測試盒動物上皮細胞生長因子Growth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
動物RNAout (TRIzol) Animal RNAOUT（TRIzol）4℃保存100mL
動物RNAout (TRIzol) Animal RNAOUT（TRIzol）4℃保存250mL
動物DNAoutAnimal DNAOUT常溫100mL
動物DNAoutAnimal DNAOUT常溫250mL
動態(tài)濁度法內(nèi)素定量試盒0.5mL
動態(tài)顯色法內(nèi)素定量試盒48次
定影粉Fixing Solution,Powder室溫避光保存1袋
型肝炎病PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T
酰膽酯酶Cholinesterase, Butyryl4℃保存500U