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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
貓庖疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs,、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶(hù)只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線(xiàn)重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線(xiàn)Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Feline Herpes Virus |
貨號(hào) | CP934235 |
貓庖疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線(xiàn)圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線(xiàn)圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用,，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
以下是貓庖疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
苯基環(huán)基酮持久型ECL免疫印跡化學(xué)發(fā)光溶液
4-(2-BOC-氨基)哌啶超敏型ECL免疫印跡化學(xué)發(fā)光溶液
3-羥基喹啉通用型DAB顯色溶液
己酸異酯增強(qiáng)型DAB顯色溶液
伊馬替尼蛋白免疫雜交封閉溶液
(S)-(-)-2-苯甘氨醇通用型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試盒
5--2-基苯并噻唑高質(zhì)型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試盒
8-鳥(niǎo)苷持久型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試盒
貓庖疹病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒2-氨基噻唑-4-酸酯超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試盒
4-(二氟氧基)苯醛通用型HRP－DAB底物顯色試盒
二芐基-N,N-二異基亞酰胺增強(qiáng)型HRP－DAB底物顯色試盒
3--4-羥基-5-硝基吡啶免疫組化AP－BCIP/NBT底物顯色試盒
反式-3--2-烯基羥胺鹽酸鹽免疫印跡AP－BCIP/NBT底物顯色試盒
3-硝基-4-羥基喹啉免疫組化AP－PNPP底物顯色定量試盒
5-基四唑蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜萘酚藍(lán)黑（NBB）染色試盒即用型易錯(cuò)PCR試盒Instant Error-Prone PCR Kit-20℃保存100次
即用型藍(lán)白T載體E型（無(wú)啟動(dòng)子，無(wú)MCS）Instant Blue-White Vector T,，Type E-20℃保存20次
即用型藍(lán)白T載體D型（無(wú)啟動(dòng)子,，有MCS）Instant Blue-White Vector T，Type D-20℃保存20次
即用型藍(lán)白T載體C型（T7-T3,，無(wú)MCS）Instant Blue-White Vector T,，Type C-20℃保存20次
即用型藍(lán)白T載體B型（T7-T3,有MCS）Instant Blue-White Vector T，Type B-20℃保存20次
即用型藍(lán)白T載體A型（T7-SP6,，有MCS）Instant Blue-White Vector T,，Type A-20℃保存20次
即用型高保真PCR試盒Instant HiFi PCR Mix-20℃保存1.5mL
即用型高保真PCR試盒Instant HiFi PCR Mix-20℃保存9mL
即用型封堵液（Nylon）Southern Blocking Buffer (Nylon)-20℃保存50mL
即用型封堵液（NC） Southern Blocking Buffer (NC)-20℃保存50mL