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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
腦膜炎黃桿菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs,、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Flavobacterium meningosepticum |
貨號(hào) | CP934241 |
產(chǎn)品特征:
腦膜炎黃桿菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是腦膜炎黃桿菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
碳酸芐基苯酯Caspase-3（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
3-氨基-5-苯鹽酸鹽 Caspase-4 p20（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
3-BROMO-5-(PYRROLIDINOCARBONYL)PYRIDINE Caspase 6（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
5-氨基-4-氰基-1-苯基-1H-吡唑-3-酸酯 Caspase-7（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
2-氟-5-異氧基苯基硼酸 Caspase-8（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
1-BOC-氨基-2,2-二基1,3-二胺 Caspase-9（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
靛青三磺酸鉀鹽 Caspase 10（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
3-氟-4-(哌啶-1-羰基)苯基硼酸MYC（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）
3-氰基苯酰 TNF alpha（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
3-PICOLINE-4-BORONIC ACID HCL TNF beta（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
腦膜炎黃桿菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒4--D-苯氨酸 CREB（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
對(duì)叔基苯磺酰 DAP Kinase（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
酸(1S,2S)-N,N'-雙[(R)-2-羥基-2'-苯基-1,1'-聯(lián)萘基-3-基亞基]-1,2-二苯基二胺合錳(III) Histone H3（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
6-氨基-2-萘酸酯 NF kappa B p65（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）
2-酰氨苯基硼酸 NF kappa B p50（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）紅薯內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
紅霉素溶液,100mg/mLErythromycin Solution-20℃避光保存10mL
紅霉素Erythromycin室溫保存1g
黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子-不含TPAGrowth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子Growth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
核糖核酸酶RNase IfRNase If -20℃保存10000U
核糖核酸酶HIIRNase HII-20℃保存250U
核糖核酸酶HRibonuclease H（RNase H） -20℃保存600U
核糖核酸酶 T1Ribonulease T14℃保存100KU
核糖核酸酶 BRibonuclease B4℃保存100mg