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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
埃希氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Escherichia spp. |
貨號(hào) | CP934222 |
產(chǎn)品特征:
埃希氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快,，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是埃希氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
2,5,6-三氨基-4-羥基嘧啶硫酸鹽C. albicans RFLP基因分析試盒
1,2-雙(三基硅氧基)烷C. glabrata RFLP基因分析試盒
三羥基烷三縮水甘油醚C. tropicalis RFLP基因分析試盒
3-碘-9苯基咔唑C. krusei RFLP基因分析試盒
3-[4-(芐氧基)苯基]烯酸C. guilliermondii RFLP基因分析試盒
二鹽基性硬脂酸鉛C. parapsilosis RFLP基因分析試盒
3--4-三氟基苯腈Cr. Neoformans RFLP基因分析試盒
3--2-硝基苯胺A. fumigatus RFLP基因分析試盒
2-吡啶-4-醛F. solani RFLP基因分析試盒
5-羥基喹喔啉Helicobacter pylori RFLP基因分析試盒
2-氰基吩噻嗪M. tuberculosis RFLP基因分析試盒
2--6-氨基苯并噻唑M. marinum RFLP基因分析試盒
雙草酸氧化鈦(IV)酸鉀二水合物M. scrofulaceum RFLP基因分析試盒
4,4’-(2,2,2-三氟-1-三氟基)亞基雙(1,2-苯二酸)M. avium RFLP基因分析試盒
5-基-4，6-二羥基嘧啶M. intracellulare RFLP基因分析試盒依替米星 Eitimicin362045-44-1200mg,，供效價(jià)測(cè)定用
埃希氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒依替米星200mg
依諾沙星-D8水合物Enoxacine-D8 hydrate25mg
依諾沙星 Enoxacin74011-58-8150mg,，含量測(cè)定
依地酸鈣鈉[二胺四醋酸鈣二鈉水合物]62-33-9（無(wú)水物）約50mg/支，供UV法檢查用
依地酸鈣鈉[二胺四醋酸鈣二鈉水合物]62-33-9（無(wú)水物）約50mg/支,，供UV法檢查用
依達(dá)拉奉純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)89-25-899.6%,，100mg
依達(dá)拉奉純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)89-25-899.6%，100mg
伊曲康唑雜質(zhì)G Itraconazole impurity G30mg/支,，檢查
伊曲康唑雜質(zhì)G Itraconazole impurity G30mg/支,，檢查
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研