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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
鏈球菌B組探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs,、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶(hù)只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Group B Streptococcus spp.(GBS) |
貨號(hào) | CP934287 |
產(chǎn)品特征:
鏈球菌B組探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是鏈球菌B組探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
2-氟-5-硝基吡啶冰凍切片肌肉酸化酶（Myophosphorylase）活性染色試盒
酸鋰全組織肌肉酸化酶（Myophosphorylase）活性染色試盒
2,6-二氧基萘石蠟切片糖原高碘酸希爾（PAS）法染色試盒
2,6-二羥基萘冰凍切片糖原高碘酸希爾（PAS）法染色試盒
氧基環(huán)戊石蠟切片結(jié)締組織（CONNECTIVE TISSUE）改良格莫瑞三色（MGT） 染色試盒
四[3,5-雙(三氟基)苯基]硼酸鈉水合物冰凍切片結(jié)締組織（CONNECTIVE TISSUE）改良格莫瑞三色（MGT）染色試盒
6-苯基吡啶-2-羧酸石蠟切片神經(jīng)纖維銀染試盒
2--4-三氟氧基苯胺冰凍切片神經(jīng)纖維銀染試盒
2--5-苯醚石蠟切片神經(jīng)纖維銀染（Bodian）試盒
(S)-(-)-N-芐基-1-苯胺冰凍切片神經(jīng)纖維銀染（Bodian）試盒
N-Cbz-3-哌啶酸酯石蠟切片神經(jīng)纖維免疫熒光染色（PGP9.5）試盒
(S)-2-基吡咯鹽酸鹽冰凍切片神經(jīng)纖維免疫熒光染色（PGP9.5）試盒
4-羥基環(huán)己酸酯石蠟切片神經(jīng)組織固藍(lán)（FAST BLUE）染色試盒
2-基烯酸酯冰凍切片神經(jīng)組織固藍(lán)（FAST BLUE）染色試盒
鏈球菌B組探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒6-吲哚石蠟切片神經(jīng)元高爾基法（GOLGI）染色試盒芐瞇鹽酸鹽Benzamidine Hydrochloride4℃保存5g
吡啰紅 GPyronin G (Pyronin Y)室溫干燥保存5g
鼻咽癌病PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
鼻腔采樣拭子 Nasal Swab常溫50支
鼻疽假單胞菌PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸，-20℃保存50T
鼻病PCR檢測(cè)試盒低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T
崩潰酶Driselase From Basidiomycetes sp-20℃保存500mg
苯基磺酰氟Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride（PMSF）室溫保存1g
苯基介質(zhì)Pheny Medium常溫保存50mL
苯酚紅Phenol Red室溫保存5g
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用,，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。產(chǎn)品僅用于科研