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產品簡介
睡眠嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應緩沖液,、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應,，具有廣泛的用途。
詳細介紹
產品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制,，抑制非特異性擴增 。
重復性好：擴增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產品僅用于科研
產品名稱 | |
英文名稱 | Haemophilus somnus |
貨號 | CP934301 |
睡眠嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度,。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，產品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步,。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機,、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準確快速,。
2. 引物經過優(yōu)化，特異性強,。預期的 PCR 產物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗結果。
以下是睡眠嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產品：
4-基傘形酮基酸酯10％Formalin固著液
4-基傘形酮基十六酸酯20％Formalin固著液
4-基傘形酮基棕櫚酸酯10％中性Formalin固著液
4-基傘形酮酰酸酯20％中性Formalin固著液
4-苯基-4'-苯磺酸酯酸性福爾馬林固著液（Formalin-Acetic Acid）
4-羥基-3-氧基苯酸酯醇福爾馬林固著液（Formalin-Alcoholic）
4-羥基苯酸酯4％多聚固著液
4-羥基苯酸酯4％中性多聚固著液
4-硝基苯酸酯2％戊二固著液（Glutaraldehyde）
4-苯基異氰酸酯Carnoy固著液
5--3-羥基吲哚酸酯Zinc固著液
5-代吲哚酚酸酯Formol sublimate固著液
9-芴基N-琥珀酰亞胺基碳酸酯Hollande固著液
D-(-)-古洛糖酸-1,4-內酯Acetic alcohol固著液
D睡眠嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒(+)-葡萄糖酸δ-內酯Susa 固著液Western印跡膜封膜液 (NC膜和PVDF膜) Western Blot Blocking Buffer4℃保存100mL
Western封堵液Western Blocking Solution-20℃保存500mL
WEHI-3[WEHI3]細胞株WEHI-3[WEHI3]低溫運輸和保存1瓶
WB600枯草桿菌WB600 Bacillus subtilis Strain-80℃保存1 管
Wash Buffer,pH8.0 Wash Buffer,pH8.0 常溫保存500mL
Wash Buffer Wash Buffer 常溫保存500mL
WarmStart Bst DNA聚合酶1600U
W256[Walker256]細胞株W256[Walker256]低溫運輸和保存1瓶
VX2細胞株VX2低溫運輸和保存1瓶
Vinblastine（長春新）Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor-20℃保存100 μL