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產品簡介
遲鈍愛德華菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應緩沖液,、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應,，具有廣泛的用途,。
詳細介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機,、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點：
1.產品僅用于科研即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單,，定量準確快速。
2. 引物經過優(yōu)化,，特異性強,。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果,。
產品名稱 | |
英文名稱 | Edwardsiella tarda |
貨號 | CP934160 |
產品特征:
遲鈍愛德華菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 ,。
重復性好：擴增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,，是指在PCR反應體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈,，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步,。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度,。
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人參皂苷Re人參皂甙ReGinsenoside Re51542-56-420mgHPLC≥98%
人參皂苷Rf,；人參皂甙RfGinsenoside Rf52286-58-520mgHPLC≥98%
人參皂苷Rg1,；人參皂甙Rg1Ginsenoside Rg122427-39-020mgHPLC≥98%
人參皂苷Rg2；人參皂甙Rg2Ginsenoside Rg252286-74-520mgHPLC≥98%
人參皂苷Rg3,；人參皂甙Rg3Ginsenoside Rg314197-60-520mgHPLC≥98%
人參皂苷Rh2,；人參皂甙Rh2Ginsenoside Rh278214-33-220mgHPLC≥98%
人參皂苷Rh3Ginsenoside Rh3105558-26-720mgHPLC≥98%
人參皂苷Rh4；參皂甙Rh4Ginsenoside Rh4174721-08-520mgHPLC≥98%
人參皂苷Rk3,；人參皂甙Rk3Ginsenoside Rk3364779-15-720mgHPLC≥98%