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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Volepox Virus |
貨號(hào) | CP934876 |
產(chǎn)品特征:
田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
NF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68 低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體營養(yǎng)瓊脂（NA）
NFKBIB/IKB beta 核因子κB抑制蛋白β抗體培養(yǎng)基
NFKBIA/IKB alpha 核因子κB抑制蛋白α抗體營養(yǎng)瓊脂平板（NA）
NFKB p65 細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體明膠生化管
NFKB p52/NFKB2 細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子 p52/p100抗體甘露醇發(fā)酵管
NFkB p105/p50 細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體蛋白胨水
NFkB p100/p52 細(xì)胞核因子p100/p52k基因結(jié)合核因子抗體Kovacs 靛基質(zhì)試
NFIC 核因子1C型抗體鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)
NF-H/Neurofilament H/Neurofilament 200 高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體氨基酸脫羧酶試驗(yàn)對(duì)照
NFEM5/IRF4/MUM1 淋巴細(xì)胞特異性干擾素調(diào)節(jié)因子抗體無菌液體石蠟
NFBD1/MDC1 DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體麥芽糖發(fā)酵管
NF-ATc4 T細(xì)胞激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體培養(yǎng)基
NFATc1/NFAT2 活化T細(xì)胞核因子1蛋白抗體木糖發(fā)酵管
NFAT5 活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體鼠李糖發(fā)酵管
NFAT4 核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體Fraser 肉湯增菌液基礎(chǔ)豬輪狀病實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒半齒澤蘭素
非洲豬瘟病實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試盒半枝蓮
豬日本型腦炎病RT-PCR檢測(cè)試盒胞苷
田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒豬日本型腦炎病實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒胞嘧啶
口蹄疫病通用型RT-PCR檢測(cè)試盒寶藿苷I
口蹄疫病Asia-I型RT-PCR檢測(cè)試盒寶藿苷II,；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A
口蹄疫病通用型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒杯莧甾酮
口蹄疫病Asia-I型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒北美芹素
口蹄疫病O型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒貝萼皂苷元
口蹄疫病A型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試盒貝母素