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產(chǎn)品簡介
螺源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs,、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機,、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強,。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | 詳見說明書 |
貨號 | CP934895 |
產(chǎn)品特征:
螺源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制,，抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好：擴增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是螺源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgMDey/Engley 中和肉湯基礎(chǔ)
Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgMDey/Engley 中和瓊脂基礎(chǔ)
Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgM緩沖蛋白胨水（BPW）
Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgM硝酸鐵瓊脂硝酸鉄寒天Ferric Nitrate Agar
Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgM培養(yǎng)基
Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM支原體肉湯培養(yǎng)基マイコプラズブイヨン基礎(chǔ)Mycoplasma Broth Medium
Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基マイコプラズマブロス培地Mycoplasma Broth Medium with Arginine
Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM支原體半流體培養(yǎng)基マイコプラズマ半流動培地Mycoplasma semifluid Medium
Mouse Anti-Rabbit IgM/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗兔IgM支原體瓊脂培養(yǎng)基マイコプラズマ寒天培地Mycoplasma Agar Medium
Mouse Anti-Rabbit IgM/APC APC標(biāo)記的小鼠抗兔IgMPPLO 肉湯基礎(chǔ)PPLO ブイヨン基礎(chǔ)PPLO Broth
Mouse Anti-Rabbit IgM/AP 性酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗兔IgMPPLO 瓊脂基礎(chǔ)PPLO ブイヨン基礎(chǔ)PPLO Agar Base
Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗兔IgM支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）マイコプラズブイヨン基礎(chǔ)Mycoplasma Broth Medium（Frey）
Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgM肺炎支原體肉湯基礎(chǔ)肺炎マイコプラズマブイヨン基礎(chǔ)Mycoplasma pneumoniae Broth Base
螺源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗兔IgM培養(yǎng)基
Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗兔IgM解脲支原體肉湯基礎(chǔ)マイコプラズマ?ウレアリチクムブイヨン基礎(chǔ)Ureaplasma urealyticum Broth Base柯薩奇病A16型/腸道病71型/腸道病三重實時熒光PCR檢測試盒丹酚酸A
腸道病(EV-U)實時熒光PCR檢測試丹酚酸B
腸道病71型(EV71)實時熒光PCR檢測試丹酚酸B二酯
柯薩奇病A16型（CA16）實時熒光PCR檢測試丹酚酸C
柯薩奇病A10型（CA10）實時熒光PCR檢測試丹酚酸D
柯薩奇病A6型(CA6)實時熒光PCR檢測試丹寧酸
麻疹病與風(fēng)疹病雙重實時熒光PCR檢測試盒丹皮酚
水痘-帶狀皰疹病核酸實時熒光PCR檢測試盒丹皮酚磺酸鈉
輪狀?。–組）實時熒光PCR檢測試盒丹皮酚新苷
輪狀病（B組）實時熒光PCR檢測試盒丹皮酚原苷