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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
黃魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
貨號(hào) | CP934923 |
產(chǎn)品特征:
黃魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快,，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是黃魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
MAL/MPV17 T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體煙
MAL T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體異香草酸
MAL MAL蛋白抗體芝麻素
MAGP2 纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體獐牙菜苦苷
MAGEL2 黑色素瘤抗原樣基因2抗體梔子苷
MAGEG1/HCA4/NDNL2 黑色素瘤相關(guān)抗原G1抗體（肝癌相關(guān)蛋白4）知母皂苷 BⅡ
MAGEF1 黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗體標(biāo)準(zhǔn)品
MAGEE1/MAGEC2 黑色素瘤相關(guān)抗原C2抗體梓醇
MAGED1 黑色素瘤相關(guān)抗原D1抗體紫杉肽
MAGEC1 黑色素瘤相關(guān)抗原C1抗體紫堇靈
MAGEB6 黑色素瘤相關(guān)抗原B6抗體紫草酸
MAGEB4 黑色素瘤相關(guān)抗原B4抗體獐牙菜苷
MAGEB3 黑色素瘤相關(guān)抗原B3抗體紫花前胡苷
MAGEB2 黑色素瘤相關(guān)抗原B2抗體紫菀酮
MAGEB1 黑色素瘤相關(guān)抗原B1抗體紫蘇葶輔助噬菌體VCSM13花生四酸
噬菌粒pcomb3HSS華蟾它靈
pcomb3HSS展示系統(tǒng)華蟾酥基
表達(dá)性宿主菌XL1-Blue槐定
輔助噬菌體VCSM13槐果
噬菌粒pcomb3XTT槐角苷
pcomb3XTT展示系統(tǒng)還原型谷胱甘肽
黃魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒融合表達(dá)性宿主菌XL1-Blue巴胺
輔助噬菌體VCSM13黃芪醇
噬菌粒pcomb3XSS前胡醚