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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Trichostrongylus rugatus |
貨號(hào) | CP934829 |
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法：
皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度,。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照,。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號(hào),。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照,。
6. 換槍頭,，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照,。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DN段作為陽性對(duì)照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。5.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
6.換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用。
7.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
Phospho-Btk(Ser180) 酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基Bismuth Sulfite Agar Medium
Phospho-BRCA1(Ser988) 酸化乳腺癌易感基因1抗體馬鈴薯葡萄糖瓊脂Potato Dextrose Agar
Phospho-BRCA1(Ser1524) 酸化乳腺癌易感基因1抗體10%酒石酸溶液10% sterile tartaric acid solution
Phospho-BRCA1(Ser1423) 酸化乳腺癌易感基因1抗體pH7.0 緩沖化鈉蛋白胨溶液Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0
Phospho-BRCA1(Ser1189) 酸化乳腺癌易感基因1抗體流體硫醇酸鹽培養(yǎng)基Fluid Thioglycollate Medium
皺紋毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒phospho-B-Raf (Thr597) 酸化B-Raf抗體大豆-酪蛋白消化物培養(yǎng)基Soybean-Casein Digest Medium
phospho-B-Raf (Thr401) 酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 1 號(hào)Medium 1Penassay Seed Agar
phospho-B-Raf (Ser602) 酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 2 號(hào)Medium 2Penassay Base Agar
phospho-B-Raf (Ser446) 酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 3 號(hào)Medium 3Penassay Broth
phospho-B-Raf (Ser444) 酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 4 號(hào)Medium 4Yeast Beef Agar
phospho-B-Raf (Ser365) 酸化B-Raf抗體抗生素培養(yǎng)基 5 號(hào)Medium 5Streptomycin Assay Agar
Phospho-BMX/ETK (Tyr556) 酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體抗生素培養(yǎng)基 8 號(hào)Medium 8
Phospho-BMX/ETK (Tyr40) 酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體抗生素培養(yǎng)基 9 號(hào)Medium 9Polymyxin Base Agar
Phospho-BLNK(Tyr96) 酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體抗生素培養(yǎng)基 10 號(hào)Medium 10Polymyxin Seed Agar
Phospho-BLNK(Tyr84) 酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體抗生素培養(yǎng)基 11 號(hào)Medium11Neomycin Assay Agar高載量PCR片段純化試盒Maxi PCR Clean-Up Kit常溫100次
高效農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備試盒20次
高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試盒High Efficiency E.coli Competent Cell Preparation Kit 低溫20次
轉(zhuǎn)基因元件RuBiSCo啟動(dòng)子探針法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件SSU啟動(dòng)子LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件SSU啟動(dòng)子PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件SSU啟動(dòng)子染料法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件SSU啟動(dòng)子探針法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tE9 LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tE9 PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tE9染料法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tE9探針法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tg7 LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tg7 PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tg7染料法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tg7探針法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tml3終止子LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tml3終止子PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tml3終止子染料法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tml3終止子探針法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tOCS LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tOCS PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tOCS染料法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件tOCS探針法熒光定量PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件泛素基因啟動(dòng)子LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件泛素基因啟動(dòng)子PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件泛素基因啟動(dòng)子染料法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件泛素基因啟動(dòng)子探針法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件小麥熱激蛋白基因終止子LAMP試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件小麥熱激蛋白基因終止子PCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件小麥熱激蛋白基因終止子染料法qPCR試劑盒
轉(zhuǎn)基因元件小麥熱激蛋白基因終止子探針法qPCR試劑盒