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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Choanotaenia infundibulum |
貨號(hào) | CP934067 |
產(chǎn)品特征:
漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
N-基-4-苯酰胺RPMI1640培養(yǎng)基
3--4-氟苯肼鹽酸鹽MEM培養(yǎng)基
雙酚芴M199培養(yǎng)基
3,5-二叔基鄰苯二酚GMEM培養(yǎng)基
間三氟基肉桂醛DMEM/F12培養(yǎng)基
2-羥基-4,5-二氧基苯酸McCOY’S 5A培養(yǎng)基
四水合氟化鋅LEIBOVITZ’S L15培養(yǎng)基
4--6-氟喹啉ISCOVE’S MDM培養(yǎng)基
三羥基烷-三[3-(2-基吖啶基)酸酯]GRACE’S 昆蟲培養(yǎng)基
5-羥基噻唑胚胎干細(xì)胞（ES）基礎(chǔ)培養(yǎng)基
依托立林小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）*培養(yǎng)基
碳酸環(huán)己胺胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)因子
漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒4-羥基咪唑鹽酸鹽胚胎干細(xì)胞基質(zhì)膠溶液
1--2-碘苯胚胎干細(xì)胞補(bǔ)充培養(yǎng)基
乳酸鎂人體胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基APOL3 載脂蛋白L3抗體桔梗
APOJ/Clusterin 載脂蛋白J抗體益智
APOH 載脂蛋白H抗體蛇床子
ApoER2 載脂蛋白E2受體抗體鹿茸（梅花鹿）
APOE4/Apolipoprotein E4 載脂蛋白E4抗體羊藿(朝鮮羊藿)
APOE3 載脂蛋白E3抗體續(xù)斷(川續(xù)斷)
APOE/Apo E2 載脂蛋白E抗體綿馬貫眾
APOE/Apo E2 載脂蛋白E抗體滿山紅（興安杜鵑）
APOD 載脂蛋白D抗體漏蘆（祁州漏蘆）
APOC4/Apolipoprotein CIV 載脂蛋白C4抗體槲寄生
APOC3 載脂蛋白C3抗體香
APOC2 載脂蛋白C2抗體大棗
APOB48R 載脂蛋白B受體抗體女貞子
ApoB/Apolipoprotein B 載脂蛋白B抗體甘遂
APOA5 載脂蛋白A5抗體石榴皮
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研