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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
耳念珠菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Candida auris |
貨號(hào) | CP934022 |
產(chǎn)品特征:
耳念珠菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是耳念珠菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
1--4-氧基烷大鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,，48T/96T
(S)-2-氨基-1-Cbz-吡咯烷鯉魚(yú)卵黃蛋白原(VTG)ELISA Kit，48T/96T
1,1,1-三氟-2,3-環(huán)氧烷人不對(duì)稱(chēng)二基精氨酸(ADMA)ELISA Kit,，48T/96T
1--3-苯氧基烷人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA Kit,，48T/96T
三酰氧基基硅烷人聚集蛋白(Agrin)ELISA Kit,，48T/96T
1,2-二(2-氨基氧基)烷人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA Kit，48T/96T
1-碘庚烷人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA Kit,，48T/96T
2-(2-氧基苯氧基)烷人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA Kit,，48T/96T
偶氮二咪唑啉基烷人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA Kit，48T/96T
耳念珠菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒二硫氰基烷人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA Kit,，48T/96T
2,2-二烷人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA Kit,，48T/96T
氘代環(huán)已烷人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA Kit，48T/96T
七基二硅氮烷人阿黑皮素原(POMC)ELISA Kit,，48T/96T
1,2-二(2-氧基)烷人白細(xì)胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA Kit,，48T/96T
1,2,3-三烷人型肝炎病X蛋白結(jié)合蛋白(HBXIP)ELISA Kit，48T/96T CAPD2/CNAP1 染色體相關(guān)蛋白2抗體尿嘧啶
CAP57 中性粒細(xì)胞殺菌蛋白BP30抗體胺肽林
CAP2 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體鹽酸妥洛特羅
CAP1/PARK7 CAP1抗體鹽酸環(huán)侖特羅
CANX/Calnexin 鈣連蛋白抗體東莨菪堿
Cancer/testis antigen 1B/1A 腫瘤/睪丸抗原1B/1A無(wú)水酸二鈉
CAMTA1 鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體鹽酸嗎啉胍
CAMKK2 鈣調(diào)蛋白激酶激酶β抗體水楊酰胺
CAMKIV/CAMK4 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激酶4抗體非普拉宗
CAMK2D/CaMKII delta 鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2D(CaMKIIδ)茴三硫
CaMK2a 鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體三叔醇
CaMK2 beta/CaMK2 gamma 鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2b/2γ抗體葡醛酸鈉
Camk1g 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)蛋白激酶IG抗體對(duì)苯酚
CAMK1D 鈣調(diào)蛋白激酶CaMK1D抗體鹽酸賽庚啶
Calumenin/CALU 鈣腔蛋白氨基比林