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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Capillaria contorta |
貨號(hào) | CP934038 |
產(chǎn)品特征:
捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
(R)-2-羥基-3-苯基酸酯人黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)ELISA Kit,，48T/96T
2,6-二-3-吡啶硼酸人套膜蛋白(iNV)ELISA Kit，48T/96T
2-氨基-3,4-二基吡啶人鳥氨酸脫羧酶(ODC)ELISA Kit,，48T/96T
1-基萘人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA Kit,，48T/96T
2-氟-4-基吡啶-5-硼酸人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA Kit，48T/96T
3,6-二-4,5-二基噠嗪人胃粘液素(GM)ELISA Kit，48T/96T
4--2-氟三氟苯人脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA Kit,，48T/96T
(S)-3-氨基哌啶雙鹽酸鹽小鼠脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA Kit,，48T/96T
捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒2,4-二噻吩大鼠脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA Kit，48T/96T
2-碘嘧啶人彈性蛋白(Elastin)ELISA Kit,，48T/96T
反-2-基-2-烯醛人肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA Kit,，48T/96T
2,4-二-3,5-二硝基三氟苯人心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA Kit，48T/96T
5-二氨基-1-萘磺酸人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA Kit,，48T/96T
2--4-基苯酚人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)ELISA Kit,，48T/96T
(R)-1-N-Boc-2-基人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)ELISA Kit，48T/96T C11ORF67/PTD015 11號(hào)染色體開放閱讀框67抗體西貝堿
C11orf65 11號(hào)染色體開放閱讀框65抗體東莨菪內(nèi)酯
C11orf57 11號(hào)染色體開放閱讀框57抗體左旋紫草素
C11orf53 11號(hào)染色體開放閱讀框53抗體龍膽苦苷
C11ORF46 11號(hào)染色體開放閱讀框46抗體仙茅苷
C11orf24 11號(hào)染色體開放閱讀框24抗體百秋李醇
C11orf21 11號(hào)染色體開放閱讀框21抗體阿魏酸
C11ORF16 11號(hào)染色體開放閱讀框16抗體青藤堿
C10orf93 10號(hào)染色體開放閱讀框93抗體胡椒堿
C10orf88 10號(hào)染色體開放閱讀框88抗體香草酸
C10orf81 10號(hào)染色體開放閱讀框81抗體柴胡皂苷a
C10orf63/Enkurin 10號(hào)染色體開放閱讀框63抗體柴胡皂苷d
C10orf62 10號(hào)染色體開放閱讀框62抗體氧化苦參堿
C10orf47 10號(hào)染色體開放閱讀框47抗體黃芪苷
C10orf4/FRA10AC1 10號(hào)染色體開放閱讀框4抗體斷血流皂苷A（醉魚草皂苷 Ⅳb）