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產(chǎn)品簡介
牛痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷,、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL,、200 µL,、1000 µL）、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn)：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Cowpox Virus(CPV) |
貨號(hào) | CP934112 |
產(chǎn)品特征:
牛痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是牛痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
3,4-二棕櫚酸吡哆醇酯核酸氧化8-羥基鳥苷（8-OHG）高效液相色譜（HPLC）分析試盒
雙(2-基己基)癸二酸酯細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）比色法測(cè)定試盒
2,5-二氟-7,7,8,8-四氰醌二烷細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）流式細(xì)胞分析試盒
L-甘露醇核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）ELISA分析試盒
5-十二炔冰凍切片核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）熒光染色測(cè)定試盒
4-羥基-3-氧硼酸頻哪醇酯石蠟切片核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）熒光染色測(cè)定試盒
4--2-氧羰基苯基硼酸核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）高效液相色譜（HPLC）分析試盒
1-苯基-1H-吡唑-4-醛細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）比色法測(cè)定試盒
3--4-羥基苯醛細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）流式細(xì)胞分析試盒
3-(三氟基)苯硼酸頻哪醇酯核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）ELISA分析試盒
5-氰基噻吩-2-硼酸冰凍切片核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）熒光染色測(cè)定試盒
牛痘病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒雙(三氟烷磺酸)二錫石蠟切片核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）熒光染色測(cè)定試盒
3-巰基苯酸核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）高效液相色譜（HPLC）分析試盒
2--5-氟苯酚通用型DNA氧化損傷AP位點(diǎn)比色法定量分析試盒
5-降冰片烯-2-醇細(xì)胞總抗氧化能力（TAC）化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試盒東莨菪內(nèi)酯92-61-520mg/支HPLC≥99%
長春質(zhì)堿2468-21-520mg/支HPLC≥98%
柴胡皂苷B1,；柴胡皂甙B1Saikosaponin B158558-08-020mgHPLC≥98%
柴胡皂苷B2；柴胡皂甙B2Saikosaponin B258316-41-920mgHPLC≥98%
柴胡皂苷C,；柴胡皂甙CSaikosaponin C20736-08-720mgHPLC≥98%
柴胡皂苷D,；柴胡皂甙DSaikosaponin D20874-52-620mgHPLC≥98%
蟾靈；蟾酥靈Bufalin465-21-420mgHPLC≥98%
蟾它靈,；蟾酥它靈,；蟾他靈Bufotalin471-95-420mgHPLC≥98%
常春藤苷C；常春藤甙CHederacoside C14216-03-620mgHPLC≥98%
常春藤苷D,；常春藤甙DHederacoside D760961-03-320mgHPLC≥98%