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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | African Swine Fever Virus(ASFV) |
貨號(hào) | CP933878 |
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法：
非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì),。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累,。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為6,，5，4,，3,，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。
5. 換槍頭,，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步）,，每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸,，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout,。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DN段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。5.換槍頭,，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
6.換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
7.換槍頭，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 4 號(hào)管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
頭孢匹胺標(biāo)準(zhǔn)品雞流行性型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢他啶△3-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品人流行性型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢他啶五水合物標(biāo)準(zhǔn)品人α羥基酸脫酶(αHBDH)ELISA Kit，48T/96T
頭孢唑肟標(biāo)準(zhǔn)品小鼠α羥基酸脫酶(αHBDH)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)品人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢曲松鈉E-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA Kit，48T/96T
頭孢呋辛鈉標(biāo)準(zhǔn)品大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢呋辛酯標(biāo)準(zhǔn)品人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA Kit,，48T/96T
頭孢呋辛酯delta-3-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA Kit，48T/96T
非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒醋酸纖維素標(biāo)準(zhǔn)品大鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA Kit,，48T/96T
纖維醋酯標(biāo)準(zhǔn)品兔子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA Kit,，48T/96T
纖維醋法酯標(biāo)準(zhǔn)品雞透明質(zhì)酸(HA)ELISA Kit，48T/96T
微晶纖維素標(biāo)準(zhǔn)品人透明質(zhì)酸(HA)ELISA Kit,，48T/96T
硅化微晶纖維素標(biāo)準(zhǔn)品小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA Kit,，48T/96T
纖維素粉標(biāo)準(zhǔn)品豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA Kit，48T/96T Goat Anti-Guinea pig IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG白黎醇苷
Goat Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGL-谷氨酸
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG酪氨酸
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG降香揮發(fā)油
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG青陽(yáng)參苷元
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG西紅花苷-Ⅱ
Goat Anti-Guinea pig IgG 羊抗豚鼠IgG重樓皂苷Ⅱ
Goat anti-Gpig IgG whole serum 羊抗豚鼠IgG抗血清重樓皂苷Ⅵ
Goat Anti-Chicken IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗雞IgG重樓皂苷Ⅶ
Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgG總銀杏酸（套）
Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgG胡黃連苷-Ⅱ
Goat Anti-Chicken IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗雞IgG雷公藤酯
Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgG脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯
Goat Anti-Chicken IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗雞IgG丹參酮ⅡA磺酸鈉
Goat Anti-Chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG金龍膽草提取物
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。