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注意事項：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：
丙酸蛛網(wǎng)菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時,，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
1. 標(biāo)記6個離心管,，分別為6，5,，4,，3,，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對照,。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5,，4，3,，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
6.換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
7.換槍頭,，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：

二二醇標(biāo)準(zhǔn)品人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA Kit,，48T/96T

酞酸二酯標(biāo)準(zhǔn)品小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA Kit，48T/96T

癸二酸二酯標(biāo)準(zhǔn)品犬葉酸(FA)ELISA Kit,，48T/96T

己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品人葉酸(FA)ELISA Kit,，48T/96T

避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)品小鼠葉酸(FA)ELISA Kit，48T/96T

醋酸雙氟拉松標(biāo)準(zhǔn)品大鼠葉酸(FA)ELISA Kit,，48T/96T

二氟尼柳標(biāo)準(zhǔn)品人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA Kit,，48T/96T

洋地黃標(biāo)準(zhǔn)品小鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA Kit，48T/96T

丙酸蛛網(wǎng)菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒洋地黃甙標(biāo)準(zhǔn)品大鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA Kit,，48T/96T

二辣椒堿標(biāo)準(zhǔn)品人游離脂肪酸(FFA)ELISA Kit,，48T/96T

酒石酸雙可待標(biāo)準(zhǔn)品小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA Kit，48T/96T

17- 雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA Kit,，48T/96T

磺酸二麥角標(biāo)準(zhǔn)品人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA Kit,，48T/96T

雙鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa)ELISA Kit,，48T/96T G protein alpha Inhibitor 2  G蛋白α抑制蛋白2抗體鹽酸雷尼替

G Protein alpha Inhibitor 1  G蛋白α抑制蛋白1抗體鹽酸哌唑嗪

G protein alpha  G蛋白α抗體鹽酸胺醇

G alpha gust  Gα gust抗體鹽酸異腎上腺素

FXYD1  酸神經(jīng)膜抗體鹽酸左旋咪唑

FXR2  脆性X相關(guān)蛋白2抗體鹽酸奈福泮

FXR1  脆性X相關(guān)蛋白1抗體重酒石酸去腎上腺素

Fx1A  腎刷狀緣抗體醋酸地孕酮

FUT8  巖藻糖轉(zhuǎn)移酶8抗體睪酮  

FUT1  巖藻糖轉(zhuǎn)移酶1抗體布美他尼

Fumarate hydratase/FH  富馬酸水合酶抗體氨環(huán)酸

FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L巖藻糖苷酶抗體胡椒腈

FTO/Protein fatso  脂肪堆積和肥胖相關(guān)蛋白抗體谷胺

FSTL5  卵泡抑素相關(guān)蛋白5抗體吡羅昔康

FSTL1/FRP  卵泡相關(guān)蛋白1吡嗪酰胺