詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 ,。
重復(fù)性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少,。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,,起峰快,效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Bordetella avium |
貨號 | CP933966 |
禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,,產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平,、離心機,、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器(2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管,、吸頭(10 µL,、200 µL、1000 µL),、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,,操作簡單,,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,,特異性強,。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,,PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果,。
以下是禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
紫杉醇相關(guān)物質(zhì)A標準品大鼠大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA Kit,48T/96T
紫杉醇相關(guān)物質(zhì)B標準品人前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit,,48T/96T
紫杉醇雜質(zhì)混合物標準品小鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit,,48T/96T
對二氨基苯酸異辛酯標準品大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit,48T/96T
棕櫚酸標準品人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit,,48T/96T
棕櫚油標準品小鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit,,48T/96T
帕米膦酸鈉標準品大鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit,48T/96T
撲酸標準品人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA Kit,,48T/96T
禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒胰酶標準品人抗淋巴細胞抗體(ALA)ELISA Kit,,48T/96T
泮庫銨標準品人沙眼衣原體抗體(CT)ELISA Kit,48T/96T
泛醇消旋體標準品人抗壁酸抗體(TA)ELISA Kit,,48T/96T
泛酯標準品人抗脂酰絲氨酸抗體(APSA)ELISA Kit,,48T/96T
泮托拉唑鈉標準品人不耐熱腸素B亞單位(LTB)ELISA Kit,48T/96T
泮托拉唑相關(guān)物質(zhì)A標準品人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF)ELISA Kit,,48T/96T
泮托拉唑相關(guān)物質(zhì)B標準品人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體(AGA)ELISA Kit,,48T/96T CTAGE6 CTAGE6蛋白抗體人絕經(jīng)尿促性素(HMG)
CTAGE5 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達抗原6)縮宮素(合成)
CTAGE4 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體促狀腺素(TSH)
CTAG2 腫瘤/睪丸抗原2抗體促黃體生成激素(LH)
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1B 腫瘤/睪丸抗原1B泌乳素
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1 腫瘤/睪丸抗原1B促卵泡生成素
CT-1/CTF1 心肌營養(yǎng)素1抗體生長激素
CT054/C20orf54 核黃素轉(zhuǎn)運蛋白2抗體人絨毛膜促性腺激素β亞單位
CT DNA(calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA抗體人胎盤泌乳素(HPL)
CSTP1 鈣調(diào)神經(jīng)酸酶CSTP1抗體鐵蛋白
CSTF2T/CstF-64 細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體癌胚抗原
CST9/Cystatin 9 胱抑素9/半胱氨酸蛋白酶抑制9抗體胎蛋白
CST8/Cystatin 8 胱抑素8/半胱氨酸蛋白酶抑制8抗體前列腺特異抗原
CST7/Cystatin F 半胱氨酸蛋白酶抑制7抗體游離前列腺特異抗原
CSPP1 中心體和紡錘體極相關(guān)蛋白1抗體三碘腺原氨酸