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產(chǎn)品簡介
禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量,。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 ,。
重復(fù)性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Bordetella avium |
貨號 | CP933966 |
禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈,，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機,、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL,、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL,、200 µL、1000 µL）,、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單,，定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強,。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果,。
以下是禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
紫杉醇相關(guān)物質(zhì)A標準品大鼠大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA Kit，48T/96T
紫杉醇相關(guān)物質(zhì)B標準品人前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit,，48T/96T
紫杉醇雜質(zhì)混合物標準品小鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit,，48T/96T
對二氨基苯酸異辛酯標準品大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit，48T/96T
棕櫚酸標準品人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit,，48T/96T
棕櫚油標準品小鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit,，48T/96T
帕米膦酸鈉標準品大鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit，48T/96T
撲酸標準品人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA Kit,，48T/96T
禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒胰酶標準品人抗淋巴細胞抗體(ALA)ELISA Kit,，48T/96T
泮庫銨標準品人沙眼衣原體抗體(CT)ELISA Kit，48T/96T
泛醇消旋體標準品人抗壁酸抗體(TA)ELISA Kit,，48T/96T
泛酯標準品人抗脂酰絲氨酸抗體(APSA)ELISA Kit,，48T/96T
泮托拉唑鈉標準品人不耐熱腸素B亞單位(LTB)ELISA Kit，48T/96T
泮托拉唑相關(guān)物質(zhì)A標準品人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF)ELISA Kit,，48T/96T
泮托拉唑相關(guān)物質(zhì)B標準品人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體(AGA)ELISA Kit,，48T/96T CTAGE6 CTAGE6蛋白抗體人絕經(jīng)尿促性素(HMG)
CTAGE5 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體（腦膜瘤表達抗原6）縮宮素(合成)
CTAGE4 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體促狀腺素（TSH）
CTAG2 腫瘤/睪丸抗原2抗體促黃體生成激素（LH）
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1B 腫瘤/睪丸抗原1B泌乳素
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1 腫瘤/睪丸抗原1B促卵泡生成素
CT-1/CTF1 心肌營養(yǎng)素1抗體生長激素
CT054/C20orf54 核黃素轉(zhuǎn)運蛋白2抗體人絨毛膜促性腺激素β亞單位
CT DNA(calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA抗體人胎盤泌乳素（HPL）
CSTP1 鈣調(diào)神經(jīng)酸酶CSTP1抗體鐵蛋白
CSTF2T/CstF-64 細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體癌胚抗原
CST9/Cystatin 9 胱抑素9/半胱氨酸蛋白酶抑制9抗體胎蛋白
CST8/Cystatin 8 胱抑素8/半胱氨酸蛋白酶抑制8抗體前列腺特異抗原
CST7/Cystatin F 半胱氨酸蛋白酶抑制7抗體游離前列腺特異抗原
CSPP1 中心體和紡錘體極相關(guān)蛋白1抗體三碘腺原氨酸