詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng):采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,,受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,,起峰快,,效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Aspergillus flavus |
貨號(hào) | CP933905 |
黃曲霉探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀,?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,,加入過(guò)量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),,從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),,產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,,就有一個(gè)熒光分子形成,,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器(2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL),。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷,、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管,、吸頭(10 µL,、200 µL、1000 µL),、滅菌雙蒸水,。
具有下列特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,,操作簡(jiǎn)單,,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,,特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,,PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。
以下是黃曲霉探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
恩曲他濱系統(tǒng)適用性混合物B標(biāo)準(zhǔn)品大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA Kit,,48T/96T
馬來(lái)酸依那普利標(biāo)準(zhǔn)品人二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,48T/96T
內(nèi)素標(biāo)準(zhǔn)品小鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,,48T/96T
恩氟烷標(biāo)準(zhǔn)品豬二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,,48T/96T
肝素標(biāo)準(zhǔn)品人抗鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)ELISA Kit,48T/96T
依諾肝素鈉溶液用于生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(SGLT1)ELISA Kit,,48T/96T
依諾肝素鈉分子量校準(zhǔn)B標(biāo)準(zhǔn)品豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)ELISA Kit,,48T/96T
恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品人8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA Kit,48T/96T
恩諾沙星相關(guān)物質(zhì)合標(biāo)準(zhǔn)品小鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA Kit,,48T/96T
恩他卡朋標(biāo)準(zhǔn)品大鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA Kit,,48T/96T
恩他卡朋相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人單胺氧化酶(MAO)ELISA Kit,48T/96T
4-差向脫水四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品小鼠白介素7(IL-7)ELISA Kit,48T/96T
(-)-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA Kit,,48T/96T
表乳酸標(biāo)準(zhǔn)品人血管緊張素Ⅰ受體抗體(ANG-ⅠR)ELISA Kit,,48T/96T
黃曲霉探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒酒石酸腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA Kit,48T/96T FGF23 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23抗體倍他環(huán)糊精
FGF22 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子22抗體卡托普利
FGF21 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21抗體卡托普利二硫化物
FGF20 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子20抗體卡前列酯
FGF19 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19抗體卡鉑
FGF18 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18抗體氮平
FGF17 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子17抗體林旦
FGF16 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子16抗體碘羥喹
FGF14 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子14抗體聯(lián)苯芐唑
FGF13 纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子13抗體聯(lián)苯芐醇
FGF12 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子12抗體萘普生鈉
FGF11 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11抗體撲米酮
FGF10 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10抗體葡萄糖酸鋅
FGF1/AFGF 酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體曲安西龍
FEZ1 腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體雙芬酸鈉