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產(chǎn)品簡介
副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Avibacterium paragallinarum |
貨號 | CP933918 |
產(chǎn)品特征:
副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 ,。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA Kit,，48T/96T
呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品人血管緊張素原(aGT)ELISA Kit,，48T/96T
呋塞米標(biāo)準(zhǔn)品小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA Kit，48T/96T
呋塞米相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA Kit,，48T/96T
呋塞米相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit,，48T/96T
加巴噴標(biāo)準(zhǔn)品小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit，48T/96T
加巴噴相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit,，48T/96T
加巴噴相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit,，48T/96T
加巴噴相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit,，48T/96T
加巴噴相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA Kit，48T/96T
釓雙胺標(biāo)準(zhǔn)品人妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA Kit,，48T/96T
副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒釓雙胺相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品小鼠妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA Kit,，48T/96T
釓雙胺相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品大鼠妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA Kit，48T/96T
釓噴酸單葡胺標(biāo)準(zhǔn)品人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA Kit,，48T/96T
釓特醇標(biāo)準(zhǔn)品小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA Kit,，48T/96T EURL/C21orf91 21號染色體開放閱讀框91抗體氟他胺
Eukaryotic aspartyl protease 天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體鹽酸氨索
ETV7 轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體辛伐他汀
ETS2 癌基因ETS2抗體厄多司坦
Ets1/ETS-1 Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體琥珀酸舒馬普坦
ETS1 associated protein II/EAPII ETS1相關(guān)蛋白2抗體鹽酸氮桌斯汀
ETK/BMX 非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體托拉塞米
ETHE1 基二酸腦病蛋白抗體萘哌地爾
ETFB 電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽/黃素蛋白抗體厄貝沙坦
ETFA 電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白α抗體奧硝唑
ETBR/Endothelin B Receptor 內(nèi)皮素B受體抗體馬來酸替加色羅
ET-3 內(nèi)皮素3抗體三苯雙脒
ET-1(2C4) 內(nèi)皮素-1單克隆抗體非那雄胺
ET-1 內(nèi)皮素-1抗體利塞膦酸鈉
ET-1 內(nèi)皮素-1抗體鹽酸法舒地爾
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀,、組織研磨器、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL、200 µL,、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。產(chǎn)品僅用于科研