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產(chǎn)品簡介
皮炎芽生菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑,、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途,。
詳細介紹
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機、熒光 PCR 擴增儀,、組織研磨器,、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL,、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單，定量準確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗結(jié)果,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Blastomyces dermatitidis |
貨號 | CP933961 |
產(chǎn)品特征:
皮炎芽生菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制,，抑制非特異性擴增 ,。
重復(fù)性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少,。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低,，起峰快，效率高,。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是皮炎芽生菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
油酰聚氧甘油酯標準品小鼠過敏素/補體片斷4a(C4a)ELISA Kit，48T/96T
油酸油醇酯標準品大鼠過敏素/補體片斷4a(C4a)ELISA Kit,，48T/96T
橄欖油標準品人黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA Kit,，48T/96T
奧氮平標準品小鼠黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA Kit，48T/96T
奧氮平相關(guān)物質(zhì)A標準品人抗肝細胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA Kit,，48T/96T
奧氮平相關(guān)物質(zhì)B標準品豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA Kit,，48T/96T
奧氮平雜質(zhì)C標準品人鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA Kit，48T/96T
奧美沙坦酯雜質(zhì)A標準品小鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA Kit，48T/96T
皮炎芽生菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒鹽酸奧洛他定標準品大鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA Kit,，48T/96T
奧洛他定相關(guān)物質(zhì)B標準品兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA Kit,，48T/96T
奧洛他定相關(guān)物質(zhì)C標準品人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA Kit，48T/96T
奧美拉唑相關(guān)FG混合物標準品人破傷風(fēng)抗體(Tetanus Ab)ELISA Kit,，48T/96T
奧美拉唑標準品人抗弓形體IgG抗體(anti-tox IgG)ELISA Kit，48T/96T
奧美拉唑相關(guān)物質(zhì)A標準品人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)ELISA Kit，48T/96T
奧美拉唑鎂標準品人腺病抗原(ADV-Ag)ELISA Kit,，48T/96T Cyclin H 周期素H抗體L-脯氨酸
Cyclin G2 周期素G2抗體L-氨酸
Cyclin G 周期素G抗體L-纈氨酸
Cyclin F 周期素F抗體L-蘇氨酸
Cyclin E2 周期素E2抗體L-異亮氨酸
Cyclin E 周期素E抗體L-色氨酸
Cyclin D3 周期素D3抗體L-亮氨酸
Cyclin D2 周期素D2抗體L-絲氨酸
Cyclin D1/FSTL3 周期素D1抗體L-甘氨酸
Cyclin C 周期素C抗體L-門冬氨酸
Cyclin B3 周期素B3抗體云芝胞內(nèi)糖肽
Cyclin B2 周期素B2抗體L-鹽酸組氨酸
Cyclin B1 周期素B1抗體腦蛋白水解物
Cyclin A2/CCN1 周期素A2抗體鹽酸半胱氨酸
Cyclin A1 周期素A1蛋白抗體舍雷肽酶