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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Amycolata autotrophica |
貨號(hào) | CP933888 |
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
探針法：
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì),。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累,。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照,。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號(hào),。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照,。
5. 換槍頭,，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照,。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步）,，每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸,，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DN段作為陽性對(duì)照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用。5.換槍頭,，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。
6.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
7.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
多粘菌素E磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品小鼠對(duì)氨基苯酸(PABA)ELISA Kit，48T/96T
共聚維酮標(biāo)準(zhǔn)品人對(duì)氧酶(PON)ELISA Kit,，48T/96T
玉米油標(biāo)準(zhǔn)品人反三碘狀腺原氨酸(rT3)ELISA Kit,，48T/96T
促腎上腺皮質(zhì)激素標(biāo)準(zhǔn)品人抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit，48T/96T
棉籽油標(biāo)準(zhǔn)品大鼠抗心脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit,，48T/96T
肌酸酐標(biāo)準(zhǔn)品人抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit,，48T/96T
色甘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品小鼠抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit，48T/96T
色甘酸鈉相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品大鼠抗心脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA Kit,，48T/96T
交聯(lián)聚維酮對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)品人抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit,，48T/96T
克羅米通標(biāo)準(zhǔn)品小鼠抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit，48T/96T
異苯標(biāo)準(zhǔn)品大鼠抗心脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit,，48T/96T
姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品牛的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA Kit,，48T/96T
類姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA Kit，48T/96T
化花青素標(biāo)準(zhǔn)品小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA Kit,，48T/96T Gibberellins 抗赤霉素抗體芫花素（暫行）
Coconut lethal yellowing phytoplasma椰子致死黃化植原體PCR試劑盒
Coconut Tinangaja Viroid(CTiVd)椰子敗生類病毒RT-PCR試劑盒
Colletotrichum kahawae咖啡漿果炭疽病菌PCR試劑盒
Cotton Leaf Crumple Virus(CLCrV)棉花皺葉病毒PCR試劑盒
Cotton Leaf Curl Virus(CLCuV)棉花曲葉病毒PCR試劑盒
Cowpea Mild Mottle Virus(CPMMV)豇豆輕斑病毒RT-PCR試劑盒
Cowpea Severe Mosaic Virus(CPSMV)豇豆重花葉病毒RT-PCR試劑盒
Crinipellis perniciosa可可叢枝病菌PCR試劑盒
Cronartium coleosporioides油松皰銹病菌PCR試劑盒
Cronartium comandrae北美松皰銹病菌PCR試劑盒
Cronartium conigenum松球果銹病菌PCR試劑盒
Cronartium fusiforme松紡錘瘤銹病菌PCR試劑盒
Cronartium ribicola松皰銹病菌PCR試劑盒
Cryphonectria cubensis桉樹潰瘍病菌PCR試劑盒
Cucumber Green Mottle Mosaic Virus(CGMMV)黃瓜綠斑駁花葉病毒RT-PCR試劑盒
Cucumber Mosaic Virus(CMV)黃瓜花葉病毒RT-PCR試劑盒
Cucurbit Yellow Stunting Disorder V(CYSDV)葫蘆黃色矮化失調(diào)病毒PCR試劑盒
Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens菜豆細(xì)菌性萎蔫病菌PCR試劑盒
Curtobacterium flaccumfaciens pv. oortii郁金香黃色皰斑病菌PCR試劑盒
Cylindrocladium parasiticum花生黑腐病菌PCR試劑盒
Cymbidium Mosaic Virus(CymMV)蘭花花葉病毒RT-PCR試劑盒
Cymbidium Ringspot Virus(CymRSV)蘭花環(huán)斑病毒PCR試劑盒
Diaporthe helianthi向日葵莖潰瘍病菌PCR試劑盒
Diaporthe perniciosa蘋果果腐病菌PCR試劑盒
Diaporthe phaseolorum大豆莖潰瘍病菌PCR試劑盒
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒GFRA4 GDNF家族受體α-4抗體醋酸羥孕酮
GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體安乃近
GFP 綠色熒光蛋白抗體（+）2-氨基醇
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間,；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。