化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
腺病毒通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Adenovirus(AV) |
貨號(hào) | CP933870 |
產(chǎn)品特征:
腺病毒通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量,。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高,，受干擾影響少,。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快,，效率高,。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其*溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其*溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度,。
以下是腺病毒通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
哌利多癸酸酯標(biāo)準(zhǔn)品大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA Kit,，48T/96T
馬來酸苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品人血小板生成素(TPO)ELISA Kit，48T/96T
布地奈德標(biāo)準(zhǔn)品小鼠血小板生成素(TPO)ELISA Kit,，48T/96T
布美他尼標(biāo)準(zhǔn)品大鼠血小板生成素(TPO)ELISA Kit,，48T/96T
布美他尼相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA Kit，48T/96T
布美他尼相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)
鹽酸布比卡因標(biāo)準(zhǔn)品大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)
布比卡因相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品雞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA Kit,，48T/96T
布比卡因相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA Kit,，48T/96T
腺病毒通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒鹽酸諾標(biāo)準(zhǔn)品小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)
諾相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品猴子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)
鹽酸螺環(huán)酮標(biāo)準(zhǔn)品大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)
仲比妥標(biāo)準(zhǔn)品兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)
布他比妥標(biāo)準(zhǔn)品人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA Kit，48T/96T
氨苯酯標(biāo)準(zhǔn)品小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG五味子素
Goat Anti-rabbit IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗兔IgG酸東莨菪堿
Goat Anti-rabbit IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG漢黃芩苷
Goat Anti-rabbit IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗兔IgG千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷
Goat Anti-rabbit IgG/FITC FITC標(biāo)記的羊抗兔IgG黃獨(dú)素B
Goat Anti-rabbit IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgG西貝母堿
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗兔IgG木蝴蝶苷A
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗兔IgG木蝴蝶苷B
Goat Anti-rabbit IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG金石蠶苷
Goat Anti-rabbit IgG/Bio 生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG連翹酯苷B
Goat Anti-rabbit IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗兔IgG棕櫚酸
Goat Anti-rabbit IgG/AP 堿性酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗兔IgG鹽酸黃柏堿
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗兔IgG碘化木蘭花堿
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗兔IgG(-)-香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗兔IgG人參皂苷Rgl
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平,、離心機(jī),、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器,、-20 ℃冰箱,、可調(diào)移液器（2 µL、20µL,、200 µL、1000 µL）,。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管,、眼科剪,、眼科鑷、生理鹽水,、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管,、吸頭（10 µL、200 µL,、1000 µL）,、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果,。產(chǎn)品僅用于科研