培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

大鼠肺位于胸腔內(nèi),，主要包含內(nèi)皮,，上皮，成纖維三種細(xì)胞,。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠肺組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠肺 組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時，可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

PEG2000 聚二醇HIV-1 TAT互動蛋白2檢測試盒

PEG10000 聚二醇  暫時不備貨HIV檢測試盒

PEG10000 聚二醇H5型禽流感病檢測試盒

PEG10000 聚二醇G蛋白偶聯(lián)受體152檢測試盒

PEG20000 聚二醇G蛋白偶聯(lián)受體109A檢測試盒

PEG20000 聚二醇G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1檢測試盒

PEG20000 聚二醇G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1檢測試盒

PEG20000 聚二醇G蛋白偶合受體44檢測試盒

Propidium Iodide 碘化啶GTP酶NRas檢測試盒

Propidium Iodide 碘化啶Gremlin-1蛋白檢測試盒
大鼠肺組織提取物 人包蟲抗體IgGelisa試盒鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液(100mg/L,基體:1%HCl)

人伴侶蛋白10elisa試盒鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶：1%硝)

人半乳糖6酯酶elisa試盒鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,,基體:1%HNO3)

人半胱氨酰白三烯elisa試盒鑭標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)

人半胱氨蛋白酶抑制elisa試盒鑭標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml in 10% HCl)

人瘢痕性天皰瘡抗體elisa試盒镥標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml in 10%HCl)

人白病抑制因子受體elisa試盒錳標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基質(zhì):1.0 mol/L HNO3)

人白病抑制因子elisa試盒錳標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶：1%硝)

人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素elisa試盒水質(zhì)錳標(biāo)樣(1.0mg/L in H2O,分析標(biāo)準(zhǔn)品)

人骨成型蛋白2elisa試盒錳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:1%HNO3)

人高靈敏度促狀腺激素elisa試盒鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度范圍:0.197(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品)

人高分子量細(xì)胞角蛋白elisa試盒鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000µg/mL,基體:5%HCl)

人高爾基蛋白73elisa試盒鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶：1%鹽)

人剛地弓形蟲elisa試盒鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)

人干細(xì)胞因子受體elisa試盒鉬標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)