詳細介紹
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,,由氮直液接拿出,,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,,也較少使用這種方式,,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,,很難說是細胞自身不行,,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,,常溫運輸也對細胞影響也不大,,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購買到貨后,由我們實驗室擴增,、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,進口來源,保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無細菌、真菌,、支原體污染,。
直腸并不直,在矢狀面上有骶曲和會陰曲兩個彎曲,,骶曲是直腸上段在骶,、尾骨前面下降,形成凸向后的彎曲,;會陰曲是直腸尾端繞過尾骨尖,,形成凸向前的彎曲。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠直腸組織中高質(zhì)量的總RNA,,PCR準備的條cDNA鏈,,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠直腸組織裂解液,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序,;<4> Western and Northern Blot,;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Rat Intestine: Normal Rectal Derivatives |
貨號 | CS-X3976 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,,同時,可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,,可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備,。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%;北美胎牛血清(United States,,GIBCO,,貨號16000-044),15%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品:
Fast Green FCF 固綠 AmrescoP物質(zhì)受體檢測試盒
Fast Green FCF 固綠 Amrescop物質(zhì)檢測試盒
2-IP N6-戊烯基腺嘌呤 (植物細胞培養(yǎng)級)P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白檢測試盒
Olaquindox 喹醇Prominin 2檢測試盒
Thioflavin T 黃素TPodocin ELISA試盒
Ethyl violet 基紫PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶檢測試盒
Dexamethasone sodium phosphate 地塞米松鈉PL12抗體/抗氨酰tRNA合成酶檢測試盒
Dexamethasone sodium phosphate 地塞米松鈉PC4,SFRS1互動蛋白1檢測試盒
L-fucose L(-)巖藻糖P53抗體ELISA試盒
Nonivamide 辣椒素P2蛋白抗體檢測試盒
大鼠直腸組織提取物人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體elisa試盒2,2,3,3,3-五氟-1-醇
人不耐熱腸素B亞單位elisa試盒1,1,2-三氯三氟(CFC-113)
人不對稱二基精氨elisa試盒苯胺(標準品)
人補體片段3b受體elisa試盒烯腈標準溶液(標準品)
人補體3裂解產(chǎn)物elisa試盒二銨
人蛋白酶3抗體elisa試盒Amberlite?IRA402 強型陰離子交換樹脂(氯型)
人蛋白酶elisa試盒Amberlite XAD-1180N 非離子型多孔樹脂(粒徑0.350 - 0.600 mm)
人補體因子Delisa試盒嘧菌酯(標準品)
人補體調(diào)節(jié)蛋白elisa試盒雙脒標準溶液(10μg/ml,u=4%)
人補體片斷5belisa試盒雙脒標準溶液(100μg/ml,u=2%)
人補體片斷5aelisa試盒滅威標準溶液(0.100mg/ml)
人補體片斷4belisa試盒艾氏標準溶液(100μg/ml,溶:醇)
人補體片斷3belisa試盒苯胺標準溶液(100mg/L,溶:水)
人補體片斷3aelisa試盒苯胺標準溶液(1000μg/ml,溶:醇)
人補體1抑制物抗體elisa試盒苯胺標準溶液(0.989 mg/ml,基體:醇)