細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實際進行人為的控制,，同時，可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學(xué),、免疫學(xué),、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等,； 適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量,、同一時期,、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象,。

腎足突基底膜是腎小球過濾膜的一部分,，組成濾膜的中層。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腎足突基底膜組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠腎足突基底膜組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

IPTG 基-β-D-代半乳糖苷 MerckⅡ型前膠原羧基端肽檢測試盒

Puerarin 葛根素Ⅱ型前膠原N端前肽檢測試盒

TPTZ 2,4,6-三吡啶基三嗪Ⅱ型膠原螺旋肽檢測試盒

TPTZ 2,4,6-三吡啶基三嗪Ⅱ型膠原交聯(lián)C端肽檢測試盒

鄰硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷ONPGⅡ型膠原代謝產(chǎn)物C2C檢測試盒

Konjac glucomannan 魔芋膠Ⅱ型膠原C端肽檢測試盒

Chlorhexidine dihydrochloride 鹽洗必泰Ⅱ型膠原檢測試盒

Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝膠G-75)Ⅱ型肺泡細胞表面抗原檢測試盒

Sephadex G-75 medium(葡聚糖凝膠G-75)28S抗核糖體抗體檢測試盒

Azure Ⅱ 天青Ⅱ26S蛋白酶體非ATP酶調(diào)節(jié)亞基11檢測試盒
大鼠腎足突基底膜組織提取物人超敏前列腺特性抗原elisa試盒2-(標(biāo)準(zhǔn)品)

人腸脂肪結(jié)合蛋白elisa試盒基三氯化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)

人腸三葉因子elisa試盒鄰苯二二(2-氧基)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)

人腸病elisa試盒滅草松標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml,,，溶：)

人層連蛋白elisa試盒1-正氨基酰-2-苯并咪唑氨基酯(97%)

人布魯氏桿菌igGelisa試盒標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)

人不透光相關(guān)蛋白elisa試盒草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)

人抗類固醇生成細胞抗體elisa試盒草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)

人抗存活素抗體elisa試盒草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)

人酰氨elisa試盒草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)

人單核細胞增多性李斯特菌素Oelisa試盒炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)

人大腸菌素elisa試盒螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)

人促胃液素受體elisa試盒螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)

人超敏C反應(yīng)蛋白elisa試盒硝醇(標(biāo)準(zhǔn)品)

人鱗狀上皮細胞癌抗原2elisa試盒氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。