培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

胃位于腹腔上部，上連食道,，下通小腸,主要用于將大塊食物研磨成小塊（又稱物理消化）,，并將食物中的大分子降解成較小的分子（又稱化學(xué)消化），以便于進一步被吸收,。主要吸收少量水和少量酒精以及很少的無機鹽,。有胃腺，分泌胃液,，胃液中含有鹽酸和蛋白酶,，可初步消化蛋白質(zhì)。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體胃壁組織和胃腫瘤組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備 胃壁和胃腫瘤組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

PIPES -1,4-二磺二十八酯

L-Arginine-L-pyroglutamate L-精氨-L-焦谷氨二十三酯

Benzyltriethylammonium chloride 芐基三基氯化銨二十四碳烯酯

a-D-葡萄糖-1-二鈉鹽二十碳四烯酯

Glycine 甘氨  Amresco二叔基二碳酯

Glycine 甘氨  Amresco二胺基基烯酯

Glycine 甘氨  Amresco二基偶二羧酯

Glycine 甘氨  Amresco二六蔗糖酯

L-Alanine L-氨二基代氨基-2,3-二氯烯酯

L-Alanine L-氨反烯二酯，延胡索二酯
人胃MatchPair: 胃壁和胃腫瘤組織提取物人抗骨骼肌抗體elisa試盒≥4400% as determined by SDS-PAGE 葡萄粉

人抗弓形體IgM抗體elisa試盒≥4401% as determined by SDS-PAGE 梅子汁濃縮物

人抗高爾基體抗體elisa試盒≥4402% as determined by SDS-PAGE 李子汁濃縮物

人抗肝細胞膜抗體elisa試盒≥4403% as determined by SDS-PAGE 可可殼酊

人抗肝細胞胞質(zhì)1型抗體elisa試盒≥4404% as determined by SDS-PAGE 香花蕾油

人抗肝特性脂蛋白抗體elisa試盒≥4405% as determined by SDS-PAGE 菊苣浸膏

人抗Sc1-70抗體elisa試盒≥4406% as determined by SDS-PAGE 櫻桃粉

人降鈣素原elisa試盒≥4407% as determined by SDS-PAGE 羅馬春*提取物

人性胎兒蛋白elisa試盒≥4408% as determined by SDS-PAGE 中國桂皮油

人降鈣素基因相關(guān)肽elisa試盒≥4409% as determined by SDS-PAGE 黑莓提取物

人抗?fàn)钕龠^氧化物酶抗體elisa試盒≥4410% as determined by SDS-PAGE 秘魯浸膏

人抗型肝炎病IgM抗體elisa試盒≥4411% as determined by SDS-PAGE 杏子提取物

人抗型肝炎病IgG抗體elisa試盒≥4412% as determined by SDS-PAGE 蘋果粉

人抗脊髓灰質(zhì)炎病elisa試盒≥4413% as determined by SDS-PAGE 甘草提取物（粉）

人抗肌內(nèi)膜抗體IgAelisa試盒≥4414% as determined by SDS-PAGE KN-62