詳細介紹
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,,干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,,還是復蘇沒操作好,;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細胞儲存的方式,,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種:
是我們復蘇好細胞,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,,排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,,只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,購買到貨后,,由我們實驗室擴增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,進口來源,,保證5代以內(nèi),活力>95%,,無細菌,、真菌、支原體污染,。
脂肪組織是體內(nèi)貯存能量的倉庫,,主要提供熱能;保護內(nèi)臟,維持體溫;協(xié)助脂溶性維生素的吸收;參與機體各方面的代謝活動等等。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠皮下脂肪組織中高質(zhì)量的總RNA,,PCR準備的條cDNA鏈,,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結果等,。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠皮下脂肪組織裂解液,,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,,-80度保存,。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆,;<2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot,;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,;<6>芯片研究與表達圖譜。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fat: Normal Rat Subcutaneous Fat Derivatives |
貨號 | CS-X4009 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,,包括活細胞的形態(tài),、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,,可以施加化學,、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存,。
以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品:
Oleanolic acid 齊墩果1-萘酯
Aseorbie acid(Vitamin C) 抗壞 維生素C2-(1-仲基)-4,6-二硝基苯基酯
Aseorbie acid(Vitamin C) 抗壞 維生素C2,2-二基酯
Thymidine 胸腺嘧啶核苷 2,4-二苯酯
Thymidine 胸腺嘧啶核苷 SIGMA2-氨基基二苯硼酯
5-Fluoro-2′-deoxyuridine 5-氟-2'-脫氧尿苷2-烯基酯
D(+)Glucose D-無水葡萄糖2-基-1,4-萘二醇二酯
D(+)Glucose D-無水葡萄糖2-基酯
D(+)Glucose D-無水葡萄糖2-氯苯二氯酯
Procaine hydrochloride 鹽普魯卡因2-羥基苯苯酯
大鼠皮下脂肪組織提取物人淋巴素β elisa試盒≥4205% as determined by SDS-PAGE 2,4-二氧基苯硼
人淋巴素αelisa試盒≥4206% as determined by SDS-PAGE 碘化亞銅
人亮氨酰氨基肽酶elisa試盒≥4207% as determined by SDS-PAGE 2-[2-(1-基)氧基]醇
人鏈激酶elisa試盒≥4208% as determined by SDS-PAGE 6-基噠嗪-3[2H]-
人痢疾內(nèi)阿米巴抗原elisa試盒≥4209% as determined by SDS-PAGE 基二二酯
人粒細胞特性抗核抗體elisa試盒≥4210% as determined by SDS-PAGE 愈創(chuàng)木酚磺鉀
人粒細胞趨化蛋白-2 elisa試盒≥4211% as determined by SDS-PAGE D-酒石二酯
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子elisa試盒≥4212% as determined by SDS-PAGE 2-基二苯
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體elisa試盒≥4213% as determined by SDS-PAGE 間羥基苯
人利什曼原蟲抗體elisa試盒≥4214% as determined by SDS-PAGE 三氟酯
人粒細胞集落刺激因子elisa試盒≥4215% as determined by SDS-PAGE 1-[2-氨基-1-(4-氧基苯基)基]環(huán)己醇鹽鹽
人利鉀尿肽elisa試盒≥4216% as determined by SDS-PAGE 1,8-萘內(nèi)酰亞胺
人冷球蛋白elisa試盒≥4217% as determined by SDS-PAGE N-Fmoc-L-天冬氨-1-叔酯
人類組織相容性復合體Ⅰ類相關基因B elisa試盒≥4218% as determined by SDS-PAGE 1,1'-二茂鐵
人類組織相容性復合體Ⅰ類相關基因A elisa試盒≥4219% as determined by SDS-PAGE 3-基苯硼