培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現用現配,。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

腎臟為成對的扁豆狀器官，位于腹膜后脊柱兩旁淺窩中,。腎動脈左右各一,，由腹主動脈垂直分出，在腸系膜上動脈下方1-2cm,第1,、2腰椎之間發(fā)出,，分別經腎門入左、右腎,。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腎動脈組織中高質量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分,。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量,。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠腎動脈組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質組學,；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產品,，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產品的質量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產品全部經過QC檢測,，進口來源，保證5代以內，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,，可以根據實際需要進行人為的控制,，同時，可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備,。
以下是公司正在銷售的相關產品： 

Nalidixic acid 萘啶15-羥基前列腺素脫酶檢測試盒

Alizarin Fluorine Blue 茜素絡合指示15-epi-氧脂素 A4檢測試盒

Alizarin Fluorine Blue 茜素絡合指示14-3-3 蛋白 beta/alpha檢測試盒

L-Alanyl-L-glutaMine L-氨酰-L-谷氨酰胺12-脂氧化酶/脂加氧酶檢測試盒

L-Alanyl-L-glutaMine L-氨酰-L-谷氨酰胺12羥二十四烯檢測試盒

Amikacin sulfate salt 阿米卡星  胺卡那11-脫氧皮質醇ELISA試盒

Amikacin sulfate salt 阿米卡星  胺卡那11去栓B2檢測試盒

Methyl jasmonate 茉莉酯11β羥類固醇脫酶1型檢測試盒

DCFH-DA 活性氧ROS熒光探針/ 二氯二熒光素-酰酯1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨檢測試盒

Pyridoxal 5－吡哆醛1,4,5-三肌醇檢測試盒
大鼠腎動脈組織提取物人凝因子Ⅱ elisa試盒≥4085% as determined by SDS-PAGE 基香酚

人凝酶原elisa試盒≥4086% as determined by SDS-PAGE 桔皮素

人凝酶原片段F1+2 elisa試盒≥4087% as determined by SDS-PAGE 黃楊

人凝酶栓調節(jié)蛋白復合物elisa試盒≥4088% as determined by SDS-PAGE 雙青蒿

人凝酶受體elisa試盒≥4089% as determined by SDS-PAGE 青蒿素

人凝酶elisa試盒≥4090% as determined by SDS-PAGE 秦皮素

人凝酶抗凝酶復合物elisa試盒≥4091% as determined by SDS-PAGE 芹菜素

人凝溶膠蛋白elisa試盒≥4092% as determined by SDS-PAGE 漆黃素

人凝聚素elisa試盒≥4093% as determined by SDS-PAGE 歐前胡素

人凝膠原蛋白elisa試盒≥4094% as determined by SDS-PAGE 白樺脂

人尿游離皮質醇elisa試盒≥4095% as determined by SDS-PAGE 白樺脂醇

人尿微量白蛋白elisa試盒≥4096% as determined by SDS-PAGE 酪醇

人尿素酶相關蛋白C elisa試盒≥4097% as determined by SDS-PAGE 諾米林

人尿嘧啶核苷化酶1 elisa試盒≥4098% as determined by SDS-PAGE 延胡索素

人尿激酶型纖溶酶原激活物受體elisa試盒≥4099% as determined by SDS-PAGE 羅通定