詳細介紹
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,,由氮直液接拿出,,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,,也較少使用這種方式,,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,,很難說是細胞自身不行,,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,,常溫運輸也對細胞影響也不大,,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購買到貨后,,由我們實驗室擴增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,進口來源,,保證5代以內(nèi),活力>95%,,無細菌,、真菌、支原體污染,。
心肌分布在心和鄰近心的大血管根部,。心肌主要由心肌纖維構(gòu)成,期間有結(jié)締組織,、心血管和神經(jīng),。心肌收縮有自主節(jié)律性,緩慢而持久,。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠心肌組織中高質(zhì)量的總RNA,,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠心肌組織裂解液,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,,-80度保存,。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆,;<2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,;<6>芯片研究與表達圖譜,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Rat Heart: Normal Heart Derivatives |
貨號 | CS-X3970 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,,包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,,同時,,可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
D-Raffinose 棉籽糖U型肌激酶,線粒體檢測試盒
D-Raffinose 棉籽糖UV切除修復蛋白RAD23 同源物A檢測試盒
D(+)Galactosamine hydrochlorideD-氨基半乳糖 SigmaU1小核核糖核蛋白A檢測試盒
D(+)Galactosamine hydrochlorideD-氨基半乳糖 SigmaT細胞急性淋巴母細胞白病相關(guān)抗原檢測試盒
D-Aspartic acid D-天冬氨/D-天門冬氨T細胞活化連接蛋白檢測試盒
Eriochrome Black T 鉻黑 TT細胞表面糖蛋白CD1a檢測試盒
Cancidas 醋卡泊芬凈T淋巴細胞白病?、?II檢測試盒
銨TU3A蛋白檢測試盒
POPOP 1,4-雙(5-苯基惡唑)苯 ( 液閃增)Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1檢測試盒
POPOP 1,4-雙(5-苯基惡唑)苯 ( 液閃增)Traf2結(jié)合蛋白檢測試盒
大鼠心肌組織提取物人單胺氧化酶elisa試盒α-六六六(標準品)
人單胺氧化酶Aelisa試盒氟鈴脲(標準品)
人蛋白Selisa試盒環(huán)嗪(標準品)
人蛋白Celisa試盒六氯
人彈性蛋白elisa試盒氯吡嘧磺?。藴势罚?/span>
人彈性蛋白酶elisa試盒噻螨(標準品)
人膽elisa試盒六氯苯標準溶液(0.100mg/ml,基體:辛)
人多免疫球蛋白受體elisa試盒β-六六六(標準品)
人多聚清蛋白elisa試盒七氯標準溶液(100μg/ml,溶:醇)
人多聚ADP核糖聚合酶elisa試盒外環(huán)氧七氯標準溶液(100μg/ml,基體:石油醚)
人多功能蛋白聚糖elisa試盒外環(huán)氧七氯標準溶液(10μg/ml,基體:石油醚)
人多巴色素構(gòu)酶elisa試盒氟吡禾靈(標準品)
人蕈型酰膽受體亞型M1elisa試盒 N-基苯胺(標準品)
人蕈型酰膽受體elisa試盒吡蟲啉(標準品)
人性休克綜合征素1elisa試盒稻瘟靈(標準品)