細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。懸浮細胞凍存時,，應將細胞收集，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后,，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。凍存培養(yǎng)基
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基,。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑,。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的,、無蛋白,、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO,，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存,。

腎位于脊柱兩側，緊貼腹后壁,，居腹膜后方,。腎屬于泌尿系統(tǒng)的一部分，負責過濾血液中的雜質,、維持體液和電解質的平衡,，后產(chǎn)生尿液經(jīng)由后續(xù)管道排出體外，同時也具備內(nèi)分泌功能以調(diào)節(jié)血壓,。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠腎組織中高質量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腎組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學,；<6>芯片研究與表達圖譜,。

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413）,，co2孵箱（日本yamato it-61）,。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱,，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),，在37℃,、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次,，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min,，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基,，溫和混勻,，吸管分裝混合液,，傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心,，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液,，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,，每兩小時隨機取出3瓶細胞,，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,，加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值,，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％,，計算貼壁率,。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,，繪制細胞生長曲線,。

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將組織剪成1mm3左右大?。?br />2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
?冷凍保存細胞之方法:

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
以下是的相關產(chǎn)品：

Acid blue 1 性藍 1(二苯藍)布魯氏菌抗體IgG檢測試盒

Bromocresol Purple 酚紫布盧姆綜合征蛋白檢測試盒

Oxacillin sodium 苯唑西林不對稱二基精氨檢測試盒

Guanosine 鳥苷 補體因子I檢測試盒

Guanosine 鳥苷 補體因子H相關蛋白1檢測試盒

TRIS-HCl （進口分裝）三羥基氨基鹽鹽補體因子H檢測試盒

TRIS-HCl （進口分裝） 三羥基氨基鹽鹽補體因子B前體檢測試盒

TRIS-HCl  三羥基氨基鹽鹽補體片斷5b檢測試盒

Maltol 麥芽酚補體片斷5a檢測試盒

Yeast 酵母粉  酵母提取物補體片斷4b檢測試盒
小鼠腎組織提取物人β干擾素elisa試盒1-代戊(>98%,BR)

人β2微球蛋白elisa試盒佛爾(>98%,BR)

人β2糖蛋白1抗體IgMelisa試盒醇胺(>98%,BR)

人I型膠原蛋白elisa試盒香草醛(>98%,BR)

人H-raselisa試盒香草醛(標準品)

人GTP酶活化蛋白elisa試盒衣康(>98%,BR)

人FMS樣酪氨激酶3elisa試盒哲納爾氏染色素

人FMS樣酪氨激酶3配體elisa試盒蛋白激酶仰制KT5823(>97%(HPLC),BC)

人Jo1抗體elisa試盒L-阿拉伯糖醇(>98%,BR)

人MAX二聚化蛋白1elisa試盒L(-)-二苯酰酒石一水(>98%,BR)

人E選擇素elisa試盒乳糖(>98%,BC)

人EJ抗體elisa試盒L-氨基氧化酶

人EB病IgMelisa試盒L-氨基氧化酶

人EB病IgGelisa試盒鑭五水(>99%,BR)

人PL7抗體elisa試盒L-刀豆氨鹽(>98%,BR)