培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

內(nèi)臟脂肪組織是人體脂肪中的一種,，與皮下脂肪不同,，它圍繞著人的臟器，主要存在于腹腔內(nèi),。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠內(nèi)臟脂肪組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠內(nèi)臟脂肪組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜,。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細菌、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學,、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate β-甘油二鈉鹽白介素5受體alpha檢測試盒

Sodium decane-1-sulfonate  1-癸磺鈉白介素5檢測試盒

8-Quinolinol hemisulfate salt 8-羥基喹啉鹽白介素4受體檢測試盒

8-Quinolinol hemisulfate salt 8-羥基喹啉鹽白介素4檢測試盒

Atorvastatin calcium  阿托伐他汀鈣白介素37檢測試盒

8-Azaguanine 8－雜鳥嘌呤白介素35檢測試盒

8-Azaguanine(原裝) 8－雜鳥嘌呤白介素33檢測試盒

Syringaldehyde 香醛白介素32檢測試盒

Repaglinide 瑞格列奈白介素31檢測試盒

SodiuM iodide 碘白介素3檢測試盒
小鼠內(nèi)臟脂肪組織提取物人ADAM金屬肽酶含小板反應蛋白1基元4elisa試盒氘代DMSO-D6(10 g )

人Ⅰ型前膠原C末端肽elisa試盒氘代DMSO-D6(10 g )

人8前列腺素elisa試盒氘代DMSO-D6(50 g )

人6前列腺素elisa試盒氘代DMSO-D6(50 g )

人6前列腺素F1aelisa試盒氘代DMSO-D6(100g )

人6-羥多巴胺elisa試盒N,N-二基酰胺-d1(1g )

人5羥色胺elisa試盒N,N-二基酰胺-d1(5g )

人5核苷酶elisa試盒1,1,2,2-四氯-d2(0.5ml x 10)

人25羥基維生素Delisa試盒1,1,2,2-四氯-d2(5g )

人17羥孕elisa試盒1,1,2,2-四氯-d2(10g )

人17羥皮質(zhì)類固醇elisa試盒1,1,2,2-四氯-d2(100g )

人11去栓B2elisa試盒銨(色譜級)

牛蛙生長激素elisa試盒氨水(色譜級)

牛卵泡抑素elisa試盒苯 (色譜級)

牛白細胞介素6elisa試盒酯(色譜級)