細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際進(jìn)行人為的控制,，同時(shí),，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影,、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué),、免疫學(xué),、腫瘤學(xué)、生物化學(xué),、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等； 適用的對象范圍廣,，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究,。
6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)可提供大量,、同一時(shí)期、重復(fù)性好的,、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象,。

輸尿管上接腎盂，下連膀胱,，是一對細(xì)長的管道,，呈扁圓柱狀，功能是輸送尿液,。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠輸尿管組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠輸尿管組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

TEMED 四基二胺  PAGE 膠促凝雌激素檢測試盒

XTT鈉鹽 XTT sodium salt 雌二醇受體檢測試盒

K-Carrageenan Karra Type  k-卡拉膠雌二醇檢測試盒

K-Carrageenan Karra Type  k-卡拉膠垂體腺苷環(huán)化酶激活肽檢測試盒

Xanthan gum 黃原膠垂草扁桃檢測試盒

Chelex 100 sodiumA螯合樹脂 穿孔素/成孔蛋白檢測試盒

Chelex 100 sodiumA螯合樹脂 程序性細(xì)胞死亡因子4檢測試盒

Chelex 100 sodiumA螯合樹脂 程序性死亡因子配體1檢測試盒

MetforMin Hydrochloride 鹽二雙胍程序性死亡-1檢測試盒

MetforMin Hydrochloride 鹽二雙胍成纖維細(xì)胞生長因子9檢測試盒
小鼠輸尿管組織提取物大鼠脂蛋白脂酶elisa試盒DST

大鼠脂蛋白脂酶A2elisa試盒2'-脫氧尿苷-5'-三三鈉鹽

大鼠脂蛋白αelisa試盒四基嘧啶羧(>98%,，BR)

大鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子elisa試盒氧化鎂碳鈉合

大鼠載脂蛋白Helisa試盒苯醚(>98%,BR)

大鼠載脂蛋白Eelisa試盒L-乳酯(>99%,GC)

大鼠載脂蛋白B100elisa試盒(>98%,BR)

大鼠載脂蛋白A1elisa試盒月桂酯(>98%,BR)

大鼠孕受體elisa試盒基曙紅(>95%,BS)

猴Ⅳ型膠原elisa試盒沒食子酯

大鼠組織型纖溶酶原激活elisa試盒煙酯(>98%,BR)

大鼠組織多肽抗原elisa試盒二茂鐵

大鼠組織蛋白去酰化酶elisa試盒反苯環(huán)胺鹽鹽,；單胺氧化酶(MAO)抑制

大鼠組織蛋白酶Kelisa試盒黃胺(>96.5%,，BS)

雞白介素3elisa試盒40%氟硼水溶液(39.0~41.0%,BC)

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。