培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

小鼠肺位于胸腔內，主要包含內皮,，上皮,，成纖維三種細胞。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠肺組織中高質量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測定結果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄,，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠肺 組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜,。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源，保證5代以內,，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài),、結構,、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品： 

DifcoTM Skim Milk 脫脂奶粉對稱二基精氨檢測試盒

DNA(Herring sperm) 鯡魚精對氨基苯檢測試盒

硅膠100目-200目端粒重復序列結合因子2檢測試盒

石英砂   AR,6-10目  （二氧化硅）端粒重復序列結合因子1檢測試盒

石英砂   AR,8-16目   （二氧化硅）端粒酶逆轉錄酶檢測試盒

石英砂   80-200目   （二氧化硅）端粒酶檢測試盒

抗A抗B型定型試（單克隆抗體）/抗A抗B 清端粒保護蛋白1檢測試盒

Rooting Powde 生根粉蕈型酰膽受體M2檢測試盒

甘露低聚糖動力蛋白輕鏈1,細胞質檢測試盒

Dextran Blue 2000 藍色葡聚糖2000型肝炎病抗體檢測試盒
小鼠肺組織提取物 大鼠特性免疫球蛋白Eelisa試盒5,5-二基-1,3-環(huán)己二

大鼠糖原化酶同工酶MMelisa試盒5-氟胞苷(>98%,BR)

大鼠胸腺活化調節(jié)趨化因子elisa試盒基苯駢三唑(>98%,BR)

大鼠性激素結合球蛋白elisa試盒5-基吲哚(>98%,BR)

大鼠信號轉導分子1elisa試盒5-硝基愈創(chuàng)木酚(植物激素級)

大鼠新生狀腺素elisa試盒6--2-萘酚(>98%,BR)

大鼠心肌營養(yǎng)素1elisa試盒6-(γ,γ-二基烯基氨基)嘌呤核苷(植物激素級)

大鼠糖原化酶同工酶IIelisa試盒6-基香豆素(>98%,，BR)

大鼠糖原化酶同工酶BBelisa試盒7-氨基頭孢

大鼠糖原合成酶激酶elisa試盒8-羥基喹哪啶(>98%,BR)

大鼠糖缺失性轉鐵蛋白elisa試盒9,10-二蒽(>98%,BR)

大鼠糖皮質類固醇受體elisa試盒雙酚芴(>98%,BR)

大鼠糖皮質激素受體βelisa試盒9-氨基吖啶單鹽單水合物(>98%,BS)

大鼠糖皮質激素受體αelisa試盒9-咔唑醇(>95%,BR)

大鼠性鐵蛋白elisa試盒?；１桨?>99%,BR)