培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

肺癌是發(fā)生于肺臟的癌病類疾病,，為常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮,，故亦稱支氣管肺癌。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體肺癌組織中高質量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行,。所有的產品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量,。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片,、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄,，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體肺癌組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質組學,；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源,，保證5代以內,，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產品： 

(-)-Epigallocatechin gallate/EGCG,；表沒食子兒茶素沒食子酯核黃素激酶檢測試盒

Imiquimod,；咪喹莫特和肽素檢測試盒

3-Hydroxybenzoic acid,；間羥基苯漢坦病檢測試盒

Trehalose；無水海藻糖含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激酶2檢測試盒

Methyl gallate,；沒食子酯含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激酶1檢測試盒

3,4-Dihydroxybenzoic acid,；原兒茶含SET域4檢測試盒

p-Hydroxybenzoic acid methyl ester；對羥基苯酯/尼泊爾金酯含patatin樣脂酶域3檢測試盒

γ-Terpinene,；γ-萜品烯過氧化脂質檢測試盒

p-Hydroxybenzoic acid；對羥基苯過氧化物酶體增殖物激活受體α檢測試盒

Ginkgolic acids,；銀杏酚過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α檢測試盒
人體肺癌組織提取物人網(wǎng)狀蛋白4(RTN4)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒2'-脫氧鳥苷-5'-一二鈉鹽(分子生物學級)

人抗C反應蛋白抗體(Anti-CRP)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒  10%醛溶液

人管內皮細胞生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 L-酒石

人緊密連接蛋白(CLDN)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒二基脲

人白介素37(IL-37)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氧化鎳

人可溶性晚期糖基化終末產物受體(sAGER)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒  吩嗪

人CXC趨化因子受體2(CXCR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒檸檬三鉀一水

人基多巴1α(MEP1α)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氯化鍶六水

人白介素26(IL26)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒聚環(huán)氧烯月桂酰醚, 20% 溶液

人鞘氨醇-1-酶1(SGPP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鈣二水

人鞘氨醇激酶1(SPHK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒2'-脫氧胞苷'-5'-(dCMP)

人鞘氨醇-1-(S1P)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒DSS(分子生物學級)

人可溶性尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(suPAR)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氧化鋰一水

人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒過鈉

人孕激素相關子宮內膜蛋白(PAEP)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 腺苷脫氨酶(15U/mg)