細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實際進(jìn)行人為的控制，同時,，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué),、腫瘤學(xué),、生物化學(xué)、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等,； 適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)可提供大量,、同一時期,、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象,。

子宮頸癌是婦科見的惡性腫瘤之一,。是指發(fā)生在子宮陰道部及宮頸管的惡性腫瘤。宮頸癌的轉(zhuǎn)移,，可向鄰近組織和器官直接蔓延,，向下至陰道穹窿及陰道壁，向上可侵犯子宮體,，向兩側(cè)可侵犯盆腔組織,，向前可侵犯膀胱，向后可侵犯直腸,。也可通過淋巴管轉(zhuǎn)移至宮頸旁,、髂內(nèi)、髂外,、腹股溝淋巴結(jié),，晚期甚至可轉(zhuǎn)移到鎖骨上及全身其他淋巴結(jié)。血行轉(zhuǎn)移比較少見,，常見的轉(zhuǎn)移部位是肺、肝及骨,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體子宮癌組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體子宮癌組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

9.375pg/mlTremella polysaccharide,；銀耳多糖活化蛋白C檢測試盒

4.688ng/mlD-Galacturonic acid monohydrate,；D-半乳糖醛一水合物混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域檢測試盒

18.75pg/mlIsatin；靛紅/吲哚-2,3-二混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)封閉因子檢測試盒

0.938ng/mlCoumarin,；香豆素蛔蟲抗體檢測試盒

56.25pg/ml6-Methylcoumarin,；6-基香豆素黃體生成素檢測試盒

15ng/mlScopoletin；東莨菪內(nèi)酯黃嘌呤氧化酶檢測試盒

7.5ng/mlVeratryl alcohol,；藜蘆醇環(huán)腺苷檢測試盒

0.094ng/ml3,4-Dimethoxybenzoic acid,；藜蘆 環(huán)鳥苷檢測試盒

0.094ng/mlEnrofloxacin；恩諾沙星環(huán)加氧酶2檢測試盒

0.094pmol/mlGuaifenesin,；愈創(chuàng)甘油醚踝蛋白檢測試盒
人體子宮癌組織提取物人核有絲分裂器蛋白1(NUMA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氧化鈣(>95%,BR)

人白介素33(IL-33)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒低粘度羥基纖維素

人黑素瘤細(xì)胞黏附分子(MCAM)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒L(+)酒石二鈉二水(>98%,BC )

人黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒  亞硝鉀(>96%,BR)

人黑素轉(zhuǎn)鐵蛋白(MFI2)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鹽吡哆胺(>98%,BC )

人非紅細(xì)胞影蛋白β4 (SPTβN4)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒水楊鈉(>99%,USP)

人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒3-(環(huán)己氨基 )-1-磺鈉(分子生物學(xué)級)

人核因子κB抑制蛋白β(IκBβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒紅素(>95%,BR)

人不均一核糖核蛋白A2/B1 (HNRPA2B1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒聚二醇800

人不均一核糖核蛋白U (HNRPU)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒炔雌醚;炔雌醇環(huán)戊醚

人維受體α(RARα)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒二酯酶 (比活度：>20 U/mg,，BC)

人核糖核酶III(RNASEN)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 碘化啶(>95% (HPLC),BC)

人黑色素瘤關(guān)聯(lián)軟骨素蛋白聚糖(MCSP)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒  十二基苯磺鈉(>95%,Tech Grade)

人α-黑色素細(xì)胞刺激素(αMSH)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 硅鈉九水(>98%，BR)

人原卟啉(EP)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒多聚鈉(>98%,，BR)

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%，無細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。