細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際進行人為的控制，同時,，可以施加化學,、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影,、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應用的學科領(lǐng)域較為寬廣,，如細胞學、免疫學,、腫瘤學,、生物化學、遺傳學,、分子生物學等,； 適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量,、同一時期,、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象,。

牙周病是口腔常見疾病,在世界范圍內(nèi)均有較高患病率,。牙周組織健康被世界衛(wèi)生組織列為衡量人類健康的十項標準之一[1]。人牙周膜組織的主體細胞為成纖維細胞,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人牙周膜組織中高質(zhì)量的總RNA,，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人牙周膜組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,；<6>芯片研究與表達圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.938ng/mlFluconazole,；氟康唑  GC≥98%基質(zhì)金屬蛋白酶2/膠酶A檢測試盒

0.094ng/mlVinblastine,；長春基質(zhì)金屬蛋白酶1酶原檢測試盒

3.75pg/mlRhodiosin,；紅景天素基質(zhì)金屬蛋白酶14檢測試盒

9.375pg/mlCyclovirobuxine,；黃楊基質(zhì)金屬蛋白酶13檢測試盒

46.875pg/mlDihydrotanshinone Ⅰ；二丹參Ⅰ基質(zhì)金屬蛋白酶12檢測試盒

0.938ng/mlIAA,；3-吲哚基質(zhì)金屬蛋白酶10檢測試盒

7.5pg/mlGramine,；蘆竹基質(zhì)金屬蛋白酶1檢測試盒

0.234ng/mlL(+)-Tartaric acid；L-酒石基質(zhì)γ羧基谷氨蛋白檢測試盒

0.938ng/mlL-arabinose,；L-阿拉伯糖基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白檢測試盒

0.188ng/mlL-Sorbose,；L-山梨糖肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶檢測試盒
人牙周膜組織提取物人膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白(FPN)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鏈滅菌溶液，30 mg/ml

人Hephaestin蛋白(HEPH)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒酰胺

人鈣衛(wèi)蛋白(CALP)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 1,3-雙(三羥基)基氨基

人11,12-二羥二十碳三烯(11,12-DHETs)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒萘酰胺(AR)

人白細胞分化抗原8(CD8)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氧化鋇八水

人足盂蛋白(PCX)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鐵屑(>98%,，BC)

人組織多肽抗原(TPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒檸檬鐵(>98%,，BR)

人組織多肽特性抗原(TPS)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 無水亞鈉(>98%，BC)

人清道夫受體B類成員1(SCARB1)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒DL-乳(85~90%,，BR)

人酰肝素(HS)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒DL-乳(USP)

人類肝素酶(HPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鈉一水(>98%,，BC)

人組織因子途徑抑制因子2(TFPI2)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒檸檬三銨

人Dickkopf相關(guān)蛋白3(DKK3)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒鉻天青S(Ind Grade)

人補體iC3b(iC3b)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒 5'-三胞苷二鈉鹽

人可溶性管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫吸附測定試盒氯化鋇二水

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%，無細菌,、真菌,、支原體污染。